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      幾種類型的膠原酶的區(qū)別及相關(guān)應(yīng)用

      2011年10月20日 15:44:29人氣:11617來源:上海玉博生物科技有限公司

      中文名稱:膠原酶I型、II型、IV型、V型

      英文名稱:Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V

      CAS號: 9001-12-1
      規(guī)格:100mg  1g
      產(chǎn)地:sigma  invitrogen
      外觀: 棕色或棕褐色結(jié)晶狀凍干粉;
      保存:-20°C
       
      膠原酶的化學名為膠原蛋白水解酶(Collagenase),它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu),而不損傷其它蛋白質(zhì)和組織。膠原酶的化學本質(zhì)是一種蛋白質(zhì),因此,這對溫度、PH和導致蛋白質(zhì)變性的各種因素均非常敏感,極易受到外界條件的影響而改變其本身的構(gòu)象和性質(zhì)。
      膠原酶(collagenase)是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬,內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時,用胰蛋白酶解離細胞的效果較差,這時可采用膠原酶解離細胞法。 膠原酶僅對細胞間質(zhì)有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞膠原酶,要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。
       

      分型
      品牌(產(chǎn)地)
      貨號
      規(guī)格
      詳細信息
      Collagenase I(膠原酶I型)
      sigma
      C-0130
      100mg/1g
      主要用于上皮、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的分離。
      invitrogen
      17100-017
      100mg/1g
      Collagenase II(膠原酶II型)
      sigma
      C-6885
      100mg/1g
      適用于肝臟,骨,甲狀腺,心臟和唾液腺組織細胞的分離。
      invitrogen
      17101-015
      100mg/1g
      Collagenase IV(膠原酶IV型)
      sigma
      C-5138
      100mg/1g
      膠原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分,分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織。
      invitrogen
      17104-019
      100mg/1g
      Collagenase V(膠原酶V型)
      sigma
      C-9263
      100mg/1g
      膠原酶包含至少7中蛋白酶成分,分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離,將結(jié)締組織分離成單個細胞。

       
       
       
       
       
      膠原酶的配置
      膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配制、消毒滅菌和儲藏。   注意:   因為Ⅰ型膠原酶分子顆粒比胰酶大,不容易過濾,因此可以用蔡式濾器過濾除菌。   鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用,因而可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培養(yǎng)液配制。
       
      膠原酶的使用
      1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm左右小塊   
      2.將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體積的膠原酶溶液,旋緊蓋子(密封燒瓶)。   
      3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nèi),每隔3min振搖一次,如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。消化時間與組織的類別很有關(guān)系,對于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織,消化時間4~48h,對于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min,也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀,一經(jīng)搖動即成細胞團或單個細胞,可以認為已消化充分。上皮組織經(jīng)膠原酶消化后,由于上皮細胞對此酶有耐受性,可能仍有一些細胞團未*分散,但成團的上皮細胞比 分散的單個上皮細胞更易生長,因此,如無特殊需要可以不必再進一步處理。   
      4.收集消化液(有時含個別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過濾),離心1000r/min,5min,去除上清,用Hanks液或者無血清培養(yǎng)液離心漂洗1~2次,去除上清,加培養(yǎng)液制成細胞懸液,接種培養(yǎng)瓶。
       
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