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人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)elisa檢測(cè)試劑盒操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
ABHD13水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體
ABHD14B水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白14B抗體
ABHD15水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體
ABHD3肺α/β水解酶蛋白3抗體
ABCF3三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞基3抗體
ABCA5三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A亞基5抗體
ADCK1ADCK1蛋白抗體
ABHD4α/β水解酶4抗體
ADCK2ADCK2蛋白抗體
ALDH16A1乙醛脫氫酶16家庭A1抗體
AMIGO3粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體
AKR1A1乙醇脫氫酶1抗體
ALADδ氨基乙酰丙酸脫水酶抗體
alpha 2 Macroglobulinα2巨球蛋白抗體
ACCSLACCSL蛋白抗體
AFP甲胎蛋白抗體
Mint3β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體
ASTN2星形肌動(dòng)蛋白抗體
TREX1系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體
phospho-ATRIP 磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體
Phospho-ATRIP 磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體
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