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      六味地黃丸含量測(cè)定方法

      2010年01月04日 14:44:15人氣:742來(lái)源:湖南中誠(chéng)制藥機(jī)械廠

        六味地黃丸處方為:熟地黃160g,山茱萸(制)80g,牡丹皮60g,山藥80g,茯苓60g,澤瀉60g2005版《中國(guó)藥典》采用液相色譜法測(cè)定了山茱萸中馬錢苷和牡丹皮中丹皮酚的含量。有關(guān)六味地黃丸制劑的含量測(cè)定方法總結(jié)如下。
         
      一、2005《中國(guó)藥典》六味地黃丸含量測(cè)定項(xiàng)下:
         
      山茱萸:
         
      色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(18487)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為236nm,柱溫40。理論板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)應(yīng)不低于4000。
         
      供試品溶液的制備:取本品水蜜丸或小蜜丸,切碎,取約0.7g,精密稱定;或取重量差異檢查項(xiàng)下的大蜜丸,剪碎,取約0.1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇25ml,密塞,稱定重量,超聲提?。üβ?/font>250W ,頻率33kH Z15分鐘,放冷,再稱定重量,用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10ml,置中性氧化鋁柱(100200目,4g,內(nèi)徑1cm,干法裝柱)上,用40%甲醇適量使溶解,并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。
         
      牡丹皮
         
      色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水(7030)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)應(yīng)不低于3500。
         
      供試品溶液的制備:取本品水蜜丸或小蜜丸,切碎,取約0.3g,精密稱定;或取重量差異檢查項(xiàng)下的大蜜丸,剪碎,取約0.4g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,密塞,稱定重量,超聲提?。üβ?/font>250W ,頻率33kH Z45分鐘,放冷,再稱定重量,用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

          二、以單皮酚為指標(biāo)
         
      李瑋玲等采用SPE-HPLC法測(cè)定六味地黃丸中丹皮酚的含量。液相色譜儀為Waters 2695;色譜柱為Hypersil ODS(2)柱(205mm×4.6mm, 5μm);流動(dòng)相為甲醇-2%冰醋酸(5545);流速為1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm;柱溫25。樣品用甲醇超聲提取后經(jīng)Sep-Pak C18微柱處理,收集第1214mL流出液。
         
      仲英等采用薄層掃描測(cè)定了六味地黃丸中丹皮酚的含量,采用日本島津CS- 910 雙波長(zhǎng)薄層掃描儀。層析條件:硅膠G板;展開(kāi)溶劑:環(huán)乙烷-氯仿-無(wú)水乙醇(731)。薄層掃描條件:反射法鋸齒掃描,波長(zhǎng)λs=274nm,λR= 365nm;掃描速度20mm/min;狹縫1.25×1.25mm;Sx=3。樣品用無(wú)水乙醇回流提取。
         
      汪顯陽(yáng)等用差示光譜法測(cè)定六味地黃丸中丹皮酚的含量,采用島津UV 2240 分光光度計(jì), 751G 分光光度計(jì)。樣品用乙醇浸出提取, 缺丹皮酚樣品為空白樣品。以蒸餾水和0.01mol/L氫氧化鈉溶液分別定容,選擇352nm為測(cè)定波長(zhǎng),370nm為參比波長(zhǎng)。
         
      趙新峰等用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法分離測(cè)定中藥材牡丹皮及中成藥六味地黃丸中丹皮酚的含量。定量采用內(nèi)標(biāo)法,選取蘆丁為內(nèi)標(biāo)。Unimicro 毛細(xì)管電泳儀美國(guó)Hyperquan.Inc 公司。所用毛細(xì)管規(guī)格為55cm有效長(zhǎng)度50cm)×75μm,檢測(cè)波長(zhǎng)274nm,電壓15 kV ,背景電解質(zhì)分別為30mmol/L SDS-30 mmol/ L硼砂,20mmol/ LSDS-50mmol/ L硼砂(pH9.4)。供試品溶液的配制:牡丹皮藥材加95%乙醇超聲提??;六味地黃丸粉碎后,5g硅藻土色譜載體,4060混研,研勻,烘干,無(wú)水乙醇超聲提取。
         
      宋麗麗等用近紅外光譜法測(cè)定六味地黃丸中丹皮酚,分別采用偏zui小二乘(PLS)、主成分分析-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)、小波變換-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)對(duì)所采集的樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。
         
      完茂林等測(cè)定六味地黃丸中丹皮酚的含量,采用毛細(xì)管氣相色譜法,以正十六烷為內(nèi)標(biāo)。日本島津GC-9A氣相色譜儀;色譜柱為熔融彈性毛細(xì)管柱28m×0. 28mm ,5μm),涂布SE-30 0.26μm, N2 流速60ml/min, H2流速50ml/min,空氣流速500ml/min,柱溫180,汽化器、檢測(cè)器320。樣品制備:六味地黃丸研細(xì)用乙醇超聲處理后用中性氧化鋁柱(100200 ,10 g11mm處理,收集乙醇洗脫液,濃縮并定容。

          三、以齊墩果酸或熊果酸為指標(biāo)
         
      馮燕芹等測(cè)定六味地黃丸(濃縮丸)中熊果酸的含量,采用HPLC法。色譜柱為ALLTIMA C18 5μ;流動(dòng)相為甲醇-水(8020);流速為0.5mL/minELSD檢測(cè)器漂移管溫度:80。樣品用乙醚回流提取。
         
      丁晴等測(cè)定六味地黃丸及六味地黃膠囊中齊墩果酸、熊果酸的含量,采用HPLC法。液相色譜儀為島津LC-10AD;色譜柱為Shim-Pack C18分析柱4.6mm×150mm,5μm);流動(dòng)相為乙腈-甲醇--乙酸胺( 7016140.5);流速1mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)215nm;柱溫為室溫。樣品處理方法:六味地黃丸(濃縮丸)用水溶解并過(guò)濾后,用乙醚加熱回流提取,殘?jiān)檬兔眩?/font>3060)浸泡,棄去石油醚液,殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ荨?/span>

          四、以馬錢素為指標(biāo)
         
      陳賀新等測(cè)定六味地黃丸中馬錢素的含量,采用RP-HPLC法。液相色譜儀為Waters 510;色譜柱為YWG-C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇-水(14);流速為0.8mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm。樣品用甲醇超聲提取。

          五、多糖、梓醇等
         
      汪顯陽(yáng)等采用苯酚硫酸法測(cè)定了六味地黃丸中多糖的含量。供試品溶液的制備:精密稱取1g六味地黃丸粉末,加80%乙醇加熱回流提取,過(guò)濾,殘?jiān)?/font>80%熱乙醇洗滌,再用蒸餾水洗滌,熱蒸餾水洗滌,合并水濾液用蒸餾水定容。
         
      劉長(zhǎng)河等用薄層掃描法測(cè)定了六味地黃丸中梓醇的含量,薄層條件:硅膠G板,展開(kāi)劑為氯仿-甲醇-水(730.5);碘蒸汽顯色。薄層掃描條件:?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)反射鋸齒掃描,掃描波長(zhǎng)為350nm,狹縫1.2mm×1.2mm,Sx=3。
         
      六味地黃丸用80%乙醇超聲處理后,經(jīng)D101型大孔吸附樹(shù)脂純化:先以水50ml洗脫,棄去;以20%甲醇50ml洗脫,合并洗脫液,濃縮并定容。
         
      趙新峰等測(cè)定中藥材山茱萸及中成藥六味地黃丸中沒(méi)食子酸的含量,采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法,選取肉桂酸為內(nèi)標(biāo)。所用毛細(xì)管規(guī)格為60cm有效長(zhǎng)度45cm)×75μm,檢測(cè)波長(zhǎng)271nm ,電壓20kV,背景電解質(zhì)為20mmol/ L硼砂,重力進(jìn)樣10cm×5s),電泳溫度20,每次運(yùn)行前依次用0.1mol/ LNaOH溶液、去離子水、電泳緩沖溶液沖洗3min。六味地黃丸用95%乙醇超聲處理。

       

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