操作步驟:
1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
產(chǎn)品名稱:MG1655 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50
包裝:100ul*50
分類:克隆感受態(tài)細(xì)胞
保存條件:4℃保存,一年有效。
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細(xì)胞種類:
凍存
對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行凍存的方法是將細(xì)胞置于含有(DMSO)等冷凍保護(hù)劑的*培養(yǎng)基中于液氮中儲(chǔ)存。冷凍保護(hù)劑可降低培養(yǎng)基的冰點(diǎn),并可減緩冷卻速度嗎,大大降低冰晶形成的危險(xiǎn) (冰晶可損傷細(xì)胞,導(dǎo)致細(xì)胞死亡)。
注:DMSO 可促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。操作含DMSO的試劑時(shí),應(yīng)采用與此類物質(zhì)安全危害相適應(yīng)的設(shè)備和操作規(guī)范,并應(yīng)按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處置此類試劑。
細(xì)胞凍存指導(dǎo)原則
凍存細(xì)胞系以備將來之用時(shí),必須遵守以下原則。與其他細(xì)胞培養(yǎng)操作一樣,我們建議您嚴(yán)格遵守您所用細(xì)胞系附帶的操作說明,以便獲得結(jié)果。
1)在高細(xì)胞濃度情況下進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,并且細(xì)胞傳代次數(shù)盡可能少。確保凍存前活細(xì)胞百分比至少為90%。請(qǐng)注意凍存條件取決于所用細(xì)胞系。
2)細(xì)胞應(yīng)緩慢冷凍,可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器使溫度每分鐘大約降低1°C。
3)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑
4)將冷凍的細(xì)胞于 -70°C 以下溫度儲(chǔ)存;溫度高于 -50°C 時(shí),冷凍的細(xì)胞將開始變質(zhì)。
5)必須使用無菌凍存管儲(chǔ)存冷凍的細(xì)胞。裝有冷凍細(xì)胞的凍存管可浸于液氮或者在液氮上方的氣相空間內(nèi)保存
6)必須穿戴個(gè)人防護(hù)設(shè)備。
7)所有與細(xì)胞接觸的溶液和設(shè)備均應(yīng)為無菌狀態(tài)。必須采用正確的無菌技術(shù),并且在層流通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。
麥冬Ophiopogon japonicus (Thunb) Ophiopogonin D 麥冬皂苷D 945619-74-9 C44H70O16 ≥98%
維生速B6VitcminB620mg/支
豆科植物紅車軸草(ifolium pretense L.)全草 ifolin 三葉豆苷 23627-87-4 C21H20O11 表兒茶速(5769
含量測(cè)定乙水楊胺100394-200401常溫,避光100mg
二類殘留溶劑-標(biāo)準(zhǔn)品1.2ml×3ampules
大葉千斤拔Flemingia macrophylla Neorauflavane none 53734-74-0 C21H22O5 ≥95%
竹節(jié)參皂苷IVaPcncxjcponicusscponinIVc21412-0-20mg
鹽膚木Rhus chinensis 3,4,4',7-Teaxy7noxyflavan 3,4,4',7-四輕基黃烷 38412-82-7 C15H14O5 單元素鐵溶液成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)080601
中藥對(duì)照藥材槐角121214-0101TLC法鑒別
Asarylaldehyde細(xì)辛醛度:≥98%
柘Cudrania icuspidata Oxyresveraol 氧化白藜蘆醇 29700-22-9 C14H12O4 ≥98%
L-亮安醋(白安醋)L-lqucinq(lqucinq)200mg/支
金錢松Pseudolarix kaempferi Tupichilignan A none 69586-96-5 C22H26O7 吡羅昔康(100177
中藥對(duì)照藥材透骨香121292-200402TLC法鑒別
20(S)-Ginsenoside-F220(S)-人參皂苷F2度:≥97%
人S100A14鈣結(jié)合蛋白(S100A14)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔子4-羥基壬烯酸(HNE)免疫試劑盒 Rabbit 4-Hydroxynonenal,HNE ELISA Kit
去乙?;?/span>Siuin-2(SI2/SIR2L/SIR2L2)ELISA試劑盒 ,英文名: SI2/SIR2L/SIR2L2 ELISA Kit
RabbitapoproteinB100,apo-B100ELISA試劑盒兔載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanai-gasicparietalcellaibody,AGPA/PCAELISA試劑盒人抗胃壁細(xì)胞抗體(AGPA/PCA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanBullousPemphigoid,BPELISAKit人大皰性類天皰瘡抗體(BP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
MG1655 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠α1干擾素(IFN-α1)免疫試劑盒 Mouse Ierferon α1,IFN-α1 ELISA Kit
細(xì)胞角蛋白20(CK20)ELISA試劑盒 ,英文名: CK20 ELISA Kit
MouseMacrophageInflammatoryProtein1β,MIP-1βELISA試劑盒小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
ELISAKitTGFβ2兔轉(zhuǎn)化生長因子β2規(guī)格:48T/96T
EELISAKit魚雌激素(E)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
注意事項(xiàng):
1. 感受態(tài)細(xì)胞好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長,長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。