操作步驟:
1.取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2.待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5.根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。
產(chǎn)品名稱:AGL1 感受態(tài)細胞100ul*10
包裝:100ul*10
分類:根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞
保存條件:4℃保存,一年有效。
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細胞種類:
凍存
對培養(yǎng)的細胞進行凍存的方法是將細胞置于含有(DMSO)等冷凍保護劑的*培養(yǎng)基中于液氮中儲存。冷凍保護劑可降低培養(yǎng)基的冰點,并可減緩冷卻速度嗎,大大降低冰晶形成的危險 (冰晶可損傷細胞,導致細胞死亡)。
注:DMSO 可促進有機分子進入組織。操作含DMSO的試劑時,應采用與此類物質(zhì)安全危害相適應的設備和操作規(guī)范,并應按照當?shù)胤ㄒ?guī)處置此類試劑。
細胞凍存指導原則
凍存細胞系以備將來之用時,必須遵守以下原則。與其他細胞培養(yǎng)操作一樣,我們建議您嚴格遵守您所用細胞系附帶的操作說明,以便獲得結(jié)果。
1)在高細胞濃度情況下進行培養(yǎng)細胞的凍存,并且細胞傳代次數(shù)盡可能少。確保凍存前活細胞百分比至少為90%。請注意凍存條件取決于所用細胞系。
2)細胞應緩慢冷凍,可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器使溫度每分鐘大約降低1°C。
3)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑
4)將冷凍的細胞于 -70°C 以下溫度儲存;溫度高于 -50°C 時,冷凍的細胞將開始變質(zhì)。
5)必須使用無菌凍存管儲存冷凍的細胞。裝有冷凍細胞的凍存管可浸于液氮或者在液氮上方的氣相空間內(nèi)保存
6)必須穿戴個人防護設備。
7)所有與細胞接觸的溶液和設備均應為無菌狀態(tài)。必須采用正確的無菌技術,并且在層流通風櫥內(nèi)進行。
桐葉千金藤Stephania hernandifolia Periglaucine B none 1025023-05-5 C20H23NO6 ≥85%
D-四輕藥根減D-fourxy7nogqnjcorrhizinqHPLC≥98%;20mg/支
黃荊Vitex negundo Vitexdoin A none 1186021-77-1 C19H18O6 (1R-(+-alpha-蒎烯16834-100
中藥對照藥材八角楓121329-200502TLC法鑒別
Gelseminic acid, Chrysaopic acid, 6-metxylesculetin東莨菪內(nèi)酯即東莨菪素度:98%
牛蒡苷元 7770-78-7 檢測用對照品 牛蒡子苷元
直桿桉Eucalyptus maideni Macrocarpal I 大果桉全 I 179388-54-6 C28H42O7 雌二醇:用于峰鑒別試驗(Y0000314
對照品人參皂苷Rg3110804-200402含量測定
pxenytoin wo7ium 本妥英標準品630-93-3 200mg本妥英標準品
漿果楝Cipadessa baccifera Ergosta-5,24(28)-diene-3,7,16-iol 甾-5,24(28)-二烯-3,7,16-三醇 289054-34-8 C28H46O3 ≥95%
7585-39-9 β-環(huán)糊精標準品 250mg
菝葜皂苷元;知母皂苷元Sarsasapogenin;sarsasapogenin16-19-;8297-74-8HPLC≥98%,20mg/支
RehMannic acid 巖茨烯 A 467-81-2
Cromolyn wo7ium色甘酸標準品15826-37-6500mg色甘酸標準品
3-氧代烏索烷-12-烯-28-羧酸 6246-46-4 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
人Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔叉頭框蛋白P3(FOXP3)免疫試劑盒 Rabbit forkhead box protein P3,FOXP3 ELISA kit
偶聯(lián)因子6(CF6)ELISA試劑盒 ,英文名: CF6 ELISA Kit
rabbitneuroophin3,-3ELISA試劑盒兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3(-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanAquaporin0,AQP-0ELISA試劑盒人水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humancommonacelymphocyticleukaemiaaigen,CALLAELISAKit人普通急性淋巴細胞白血病抗原(CALLA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
AGL1 感受態(tài)細胞100ul*10人膽固醇(CH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)免疫試劑盒 Mouse 6-keto-prostaglandin F1a,6-K-PGF1a ELISA Kit
突觸泡蛋白(SYP)ELISA試劑盒 ,英文名: SYP ELISA Kit
MouseProteinPhosphatase,PPELISA試劑盒小鼠蛋酸酶(PP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Chickenheparansulfate,HSELISA試劑盒雞類肝素(HS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Human5-hydroxyindolaceticacid,5-HIAAELISAKit人5羥基吲哚乙酸(5-HIAA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
注意事項:
1. 感受態(tài)細胞好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。