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      人CD3分子(CD3)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

      2011年08月23日 09:45:04人氣:1278來源:上海研生生化試劑有限公司

      使用目的:
      本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中CD3分子(CD3)含量。
      實驗原理
      本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人CD3分子(CD3)水平。用純化的人CD3分子(CD3)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入CD3分子(CD3),再與HRP標記的CD3分子(CD3)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CD3分子(CD3)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人CD3分子(CD3)濃度。
      試劑盒組成
      1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
      2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(160 IU/ml) 0.5ml×1瓶
      3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
      4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
      5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
      6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個


      人CD3分子(CD3)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
      標本要求
      1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
      2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
      操作步驟
      1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
      80 IU/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
      40 IU/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
      20 IU/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
      10 IU/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
      5 IU/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液




      2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
      3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
      4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
      5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
      6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
      7. 溫育:操作同3。
      8. 洗滌:操作同5。
      9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
      10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
      11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
      人CD3分子(CD3)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
      操作程序總結(jié):

      計算
      以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
      注意事項
      1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
      2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
      3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
      4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
      5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
      6.底物請避光保存。
      7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
      8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
      9.本試劑不同批號組分不得混用。
      10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
      保存條件及有效期
      1.試劑盒保存:;2-8℃。
      2.有效期:6個月
       

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