檢測范圍： 96T

1ng/L - 24ng/L

使用目的：

本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關液體樣本中輪狀病毒抗體含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛輪狀病毒抗體水平。用純化的牛輪狀病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入輪狀病毒抗體，再與HRP標記的輪狀病毒抗體抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛輪狀病毒抗體呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中牛輪狀病毒抗體濃度。

試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶

2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品（48ng/L）
0.5ml×1瓶

3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶

4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份

5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張

6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個
 

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

24ng/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

12ng/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

6ng/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

3ng/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

1.5ng/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
 

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

1.準備試劑，樣品和標準品

2.加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘

3.洗板5次，加入酶標試劑，37℃反應30分鐘

4.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應10分鐘

5.加入終止液

6.15分鐘之內(nèi)度OD值

7.計算

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。