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一、如何從變形桿菌中分離G+球菌?
A、用棉簽沾無水乙醇涂布于MH平板上,置入溫箱中烘干,讓瓊脂脫水。將球菌接種到該平板上即可。此平板可抑制變形桿菌的遷徙生長。
B、在分離平板上貼氨曲南紙片可以分出G+菌。
二、同一標本中同時存在金葡和變形桿菌的分離方法?
A、解決的辦法:以前曾經(jīng)討論過多種解決試劑盒和其他細菌混合生長時的單菌落分離方法,如加大瓊脂硬度、接種高鹽肉湯等。我個人比較喜歡貼藥敏紙片的方法。挑取含有金葡菌的菌苔劃線分離后,在*區(qū)和第二區(qū)的交界處貼一張頭孢西丁紙片。經(jīng)培養(yǎng)后,頭孢西丁紙片周圍生長的試劑盒被抑制,而金葡菌仍可以生長。此時應即使挑取抑菌圈中的金葡菌進行純分離,從而達到將兩種細菌*分離的目的。
B、貼氨曲南紙片可抑制變形桿菌生長,而金葡菌耐藥,這樣就可以把金葡分出來。
C、分純方法應根據(jù)目標菌不同而異。我喜歡用時間差的方發(fā)來分純,這樣不會使目標菌受抑制。這要看那株變形桿菌的遷徙速度了,一般4-6h可以分離到目標菌。
D、我用過一種弱選擇的麥慷慨,成品的,葡萄球菌可以生長,變形遷徙生長可以被抑制,oxoid的。
評價一:老師的方法不錯,有空試試!我試過用時間差的方法,比較麻煩.操作過程如下:挑起混合菌分區(qū)接種于血平板上,待平板上剛長出小菌落后,挑取菌落涂片染色,找到革蘭陽性球菌就立刻轉(zhuǎn)種.這個過程比較麻煩,一定要在變形菌沒有明顯擴大的時候挑取菌落涂片,培養(yǎng)時間一般4~6小時,這個時間內(nèi)葡萄球菌和變形菌只形成小菌落,而變形還沒有明顯遷徙.涂片時可以只看濕片.
評價二:我認為幾種方法各有長處:如果變形桿菌生長慢的話,時間差法很好,可以節(jié)省時間,早些發(fā)出報告;如果變形生長快,只能用傾倒酒精法或貼紙片法,貼紙片法不是的,如都敏感或都耐藥,很難分離出純菌,酒精法沒試過不知效果如何:至于增加瓊脂硬度,我覺得有些麻煩,還要單獨配一些這樣平皿(是現(xiàn)配還是提前備一些?)
三、總結(jié)解決的辦法有:
1、貼藥敏紙片的方法。挑取含有金葡菌的菌苔劃線分離后,在*區(qū)和第二區(qū)的交界處貼一張頭孢西丁紙片。經(jīng)培養(yǎng)后,頭孢西丁紙片周圍生長的試劑盒被抑制,而金葡菌仍可以生長。此時應即使挑取抑菌圈中的金葡菌進行純分離,從而達到將兩種細菌*分離的目的。
2、配制平皿時混入少許95%的酒精,混勻后倒平板;或者在血平板上倒入95%酒精后,把剩余酒精倒掉,平板表面干后即可。用于分離金葡菌和變形桿菌。酒精主要起抑制變形桿菌的遷徙作用。
注:酒精平板:90mm平板加無水乙醇0.5ml加20ml血液瓊脂基礎(用進口的哥倫比亞瓊脂配制)或M-H瓊脂基礎。
3、加了結(jié)晶紫的麥康凱葡萄球菌不長,變形不遷徙。另外,提高血平板的瓊脂含量到4%,也可以將二者分開。
4、時間差的方法,操作過程如下:挑起混合菌分區(qū)接種于血平板上,待平板上剛長出小菌落后,挑取菌落涂片染色,找到革蘭陽性球菌就立刻轉(zhuǎn)種。這個過程比較麻煩,一定要在變形菌沒有明顯擴大的時候挑取菌落涂片,培養(yǎng)時間一般4~6小時,這個時間內(nèi)葡萄球菌和變形菌只形成小菌落,而變形還沒有明顯遷徙.涂片時可以只看濕片。
5、大腸等其它腸桿菌科細菌,就分個ss,可以將二者區(qū)分開!
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