1、色譜柱中的流動相是否會排干
不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形；不慎未及時補充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實上，如果泵將溶濟瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會將空氣排入色譜柱。因為泵只能輸送液體，而不能輸送空氣。相比之下，另一個更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種*脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的四醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面：已脫氣的溶劑應該能夠溶解并支隊滯留在填料中的氣體。色譜柱大紙需要（以1mL/min的流速）沖一個小時或更多的時間被*浸潤，恢復到正常狀態(tài)。
2、使用PEEK管路和接頭需要注意什么問題
如果經(jīng)常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會非常方便。PEEK管路容易連接；PEEK接頭不僅無需工具，手擰即可固定，而且容易調(diào)節(jié)錐箍之外的管路長度，方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。使用此類材料的管路需要注意的是：PEEK對鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK遇到上述溶劑會變脆。另一個需要考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應用系統(tǒng)壓力不會超過3000psi）。使用PEEK接頭時則無需擔心接頭耐溶劑性能，因為接頭幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手擰固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時，可能會使接頭在管路上滑動而產(chǎn)生死體積或漏液。
3、色譜柱的平衡時間
如果我們觀察到保留時間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用流動相*平衡。通常平衡需要10-20個柱體積的流動相，但如果在流動相中加入少量添加劑（如離子對試劑）則需要相當長的時間來平衡色譜柱。流動相污染也可能是原因之一。溶于流動相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保留時間的漂移。應注意：水是很容易污染的流動相萬分。
4、固定相穩(wěn)定性
固定相的穩(wěn)定性都是有限的，即使在推薦的PH范圍內(nèi)使用，固定相也會慢慢水解。例如，硅膠基質在PH4時水解穩(wěn)定性。水解速度與流動相類型和配體有關。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩(wěn)定；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。經(jīng)常清洗色譜柱亦會加速色譜柱固定相的水解。其它硅膠基質鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。
5、鍵合相疏水塌陷
當小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近*的水為流動相時，有時會發(fā)生分離突然喪失有被分析物質保留明顯降低或*不保留的現(xiàn)象，這就是疏水坍塌。此現(xiàn)象是由流動相不浸潤固定相表面而致。挽救的辦法實現(xiàn)用含大量有機組分的流動相浸潤固定相，再用高水含量的流動相進行平衡。尤其是色譜柱長期儲存也會發(fā)生此現(xiàn)象。使用內(nèi)嵌極性基團的反相色譜柱（如Waters SymmetryShield RP 色譜柱）或非端基封口的色譜柱（如Waters Resolve 色譜柱）也可避免發(fā)生坍塌。