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大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒實驗原理:
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或者標(biāo)準(zhǔn)品、化的抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定OD值,計算樣品濃度。
大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒反應(yīng)步驟:
(1)嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30~60min。
(2)加樣后及時放人孵箱。標(biāo)本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
(3)封板溫育時,各孔一定要封嚴(yán),防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。
(4)用洗板機洗板時,保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,ELISA試劑盒這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。
(5)合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
(6)加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
(7)顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
(8)加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
(9)應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔,整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板"降至zui低限度。ELISA試劑盒豚鼠從而提高檢測的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實驗結(jié)果。
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