高效液相色譜儀流動(dòng)相的選用要求包括流動(dòng)相性質(zhì)要求、流動(dòng)相選擇、流動(dòng)相pH值、流動(dòng)相脫氣、流動(dòng)相過(guò)濾、流動(dòng)相貯存、鹵代溶劑應(yīng)特別注意的問(wèn)題和HPLC用水等方面。

一、流動(dòng)相脫氣：

1、流動(dòng)相脫氣的原因：

HPLC所用流動(dòng)相必須預(yù)先脫氣，否則容易在系統(tǒng)內(nèi)逸出氣泡，影響泵工作、柱分離效率、檢測(cè)器靈敏度和基線穩(wěn)定性，甚至無(wú)法檢測(cè)。

（1）流動(dòng)相中的溶解氧可能與樣品、流動(dòng)相甚至固定相（如烷基胺）反應(yīng)。

（2）溶解氧會(huì)引起溶劑pH變化，給分析結(jié)果帶來(lái)誤差。

（3）溶解氧能與某些溶劑（如甲醇和四氫呋喃）形成有紫外吸收的絡(luò)合物，此絡(luò)合物會(huì)提高背景吸收（特別是在260nm以下），導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度輕微降低，更重要的是在梯度洗脫時(shí)會(huì)造成基線漂移或形成鬼峰。除去溶解氧將大大提高UVD的性能。

（4）在熒光檢測(cè)中，溶解氧在一定條件下會(huì)引起淬滅現(xiàn)象，特別是對(duì)芳香烴、脂肪醛和酮等。在某些情況下，熒光響應(yīng)可降低達(dá)95%。除去溶解氧將改善在一些熒光檢測(cè)中的靈敏度。

（5）在電化學(xué)檢測(cè)中（特別是還原電化學(xué)法），溶解氧的影響更大。

2、常用脫氣方法：

有吹氦脫氣法、加熱回留法、超聲波脫氣法、抽真空脫氣法和在線真空脫氣法等。

二、流動(dòng)相過(guò)濾：

所有溶劑使用前都必須經(jīng)0.45μm或0.22μm濾膜過(guò)濾，以除去雜質(zhì)微粒。色譜純?cè)噭┮膊焕?，除非在?biāo)簽上標(biāo)明已過(guò)濾。

用濾膜過(guò)濾時(shí)，要注意分清有機(jī)相（脂溶性）濾膜和水相（水溶性）濾膜。

有機(jī)相濾膜一般用于過(guò)濾有機(jī)溶劑，過(guò)濾水溶液時(shí)流速低或過(guò)濾不動(dòng)。

水相濾膜只能用于過(guò)濾水溶液，嚴(yán)禁用于有機(jī)溶劑。否則濾膜會(huì)被溶解，溶有濾膜的溶劑不得用于HPLC。

對(duì)于混合流動(dòng)相，可在混合前分別過(guò)濾。如需混合后過(guò)濾，有機(jī)相濾膜。現(xiàn)已有混合型濾膜。

三、流動(dòng)相貯存：

流動(dòng)相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。因?yàn)樵S多有機(jī)溶劑（如甲醇和乙酸等）可浸出塑料表面的增塑劑，導(dǎo)致溶劑被污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng)，可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，防止氧和二氧化碳溶入流動(dòng)相。

磷酸鹽和乙酸鹽緩沖液很容易長(zhǎng)霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用，不要貯存。如確需貯存，可在冰箱內(nèi)冷藏，并在3天內(nèi)使用，用前應(yīng)重新過(guò)濾。

容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的容器，以除去容器底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長(zhǎng)的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的容器無(wú)此現(xiàn)象。

四、鹵代溶劑應(yīng)特別注意的問(wèn)題：

1、鹵代溶劑可能含有微量的酸性雜質(zhì)，能與HPLC系統(tǒng)中的不銹鋼反應(yīng)。

2、鹵代溶劑與水的混合物比較容易反應(yīng)，不能存放太久。

3、鹵代溶劑（如CCl4和CHCl3）等與各種醚類（如二異丙醚和四氫呋喃等）混合后，可能會(huì)反應(yīng)生成一些對(duì)不銹鋼有較大腐蝕性的產(chǎn)物，這種混合流動(dòng)相應(yīng)盡量不采用或新鮮配制。

4、鹵代溶劑（如CH2Cl2）與一些反應(yīng)性有機(jī)溶劑（如乙腈）混合靜置時(shí)，會(huì)產(chǎn)生結(jié)晶。

總之，鹵代溶劑新鮮配制使用。如果是和干燥的飽和烷烴混合，則不會(huì)產(chǎn)生類似問(wèn)題。

五、HPLC用水：

HPLC應(yīng)用中要求用超純水，如檢測(cè)器基線的校正和反相柱的洗脫。