線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性測試盒洗滌方法：

1. 自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。

3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止)。

7.每孔加終止液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。

 細胞名稱

人絨毛膜毛細血管內(nèi)皮細胞

人羊膜上皮細胞

人絨毛間充質(zhì)成纖維細胞

人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細胞

人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細胞

 正常細胞

NRK-52E，大鼠腎細胞

H9c2大鼠心肌細胞（ATCC來源）

C2C12, 小鼠肌原細胞

NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系

大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）

HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系

CHO, 中國倉鼠卵巢細胞系

COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞

SF9, 昆蟲卵巢細胞

BRL 3A, 大鼠肝正常細胞

HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞

HET-1A, 人食管上皮細胞

RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞

GC-1, 鼠精原細胞

293A，人胚腎上皮細胞系（腺病毒包裝級別）