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液相HPLC中常用的檢測器分有如下幾種，紫外吸收檢測器（UVD）、二極管陣列檢測器（PDAD）、熒光檢測器（FLD）、示差折光檢測器（RID）、蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）、質(zhì)譜檢測器（MSD）等。小編這里重點介紹了實驗室常見的液相檢測器的原理，并對它們在實踐中的應(yīng)用的優(yōu)缺點分別進(jìn)行分析，供大家參考。

一、紫外吸收檢測器（UVD）

紫外吸收檢測器是應(yīng)用比較多的檢測器，大部分的液相都會配有紫外檢測器，該檢測器也能對絕大部分的藥物有響應(yīng)。通常分為兩類：可變波長檢測器和二極管陣列檢測器。

1、紫外檢測器原理

遵循的是朗伯比爾定律：當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時,其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收層厚度b成正比。如果厚度固定，公式可表示為A=kc。也就是說，理論上供試品的響應(yīng)值與濃度做線性回歸的話，應(yīng)該是一條經(jīng)過原點的曲線。這就是含量測定外標(biāo)法的理論依據(jù)。

但是實際上由于儀器的進(jìn)樣誤差、人員操作誤差、流動相的本底吸收等因素的影響，線性不可能經(jīng)過原點，線性方程中都有一個不是零的截距。這就是對照品濃度和供試品濃度應(yīng)接近的原因，線性如果經(jīng)過原點，任何對照品的濃度都可以用來測定供試品的結(jié)果。線性不經(jīng)過原點，對照品濃度與供試品濃度相差越大，計算結(jié)果誤差越大。

由這個討論我們又扯出另一個話題，就是有關(guān)物質(zhì)檢測項的自身對照溶液濃度應(yīng)該是多少的問題。比如原料藥，有將供試品稀釋1000倍，有稀釋100倍的，到底哪個濃度合適？我想之前的討論可以給出一個合理的答案了，就是如果截距很小，二者區(qū)別不大，隨便那個濃度都可以。如果截距較大，則應(yīng)選擇和雜質(zhì)規(guī)定限度附件的濃度，一般是稀釋1000倍。較小或者較大怎么判斷，個人認(rèn)為可以5%為分界線。當(dāng)然，zui終還是看回收率的結(jié)果，能夠滿足回收率的要求就可以。

2、優(yōu)缺點

優(yōu)點很多，讓人印象深刻的就是憨厚，等度梯度緩沖鹽隨便用，好說話的一塌糊涂。還有就是供試品的量與響應(yīng)者呈良好線性，方便計算檢測結(jié)果。另外適用范圍較廣，只要有紫外吸收的物質(zhì)都可以應(yīng)用。

缺點不多：一個是樣品必須有紫外吸收，另外一個就是對流動相有一定的要求，流動相的紫外吸收應(yīng)盡可能的小，否則會有較大的本底吸收。本底吸收也是截距的一大來源，樣品的響應(yīng)等于本身的吸收減去流動相本底吸收，如果本底吸收為固定值b的話，樣品在儀器上實際的響應(yīng)者為A=kc-b。流動相的影響在有關(guān)物質(zhì)檢測中較為明顯，因為雜質(zhì)量小，響應(yīng)弱，流動相的影響就較大，這個需要注意。就是說開發(fā)方法時檢測波長應(yīng)盡可能大于流動相的截止波長。

二、熒光檢測器

熒光檢測器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測器，可檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，再進(jìn)行熒光檢測。其zui小檢測濃度可達(dá)0.1ng／ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數(shù)量級，但其線性范圍不如紫外檢測器寬。

近年來，采用激光作為熒光檢測器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測器極大地增強(qiáng)了熒光檢測的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。

1、原理

化合物受紫外光激發(fā)后，發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的光，稱為熒光；熒光強(qiáng)度 (F) 與激發(fā)光強(qiáng)度 (I0) 及熒光物質(zhì)濃度 (C) 之間的關(guān)系為：F=2.3QKI0εCl；F=KC

Q為量子產(chǎn)率，K為熒光效率，ε為摩爾吸光系數(shù)，l為光徑長度。

從電子躍遷的角度來講，熒光是指某些物質(zhì)吸收了與它本身特征頻率相同的光線以后，原子中的某些電子從基態(tài)中的zui低振動能級躍遷到較高的某些振動能級。電子在同類分子或其他分子中撞擊，消耗了相當(dāng)?shù)哪芰?，從而下降?電子激發(fā)態(tài)中的zui低振動能級，能量的這種轉(zhuǎn)移形式稱為*躍遷。由zui低振動能級下降到基態(tài)中的某些不同能級，同時發(fā)出比原來吸收的頻率低、波長長的一種光，就是熒光。被化合物吸收的光稱為激發(fā)光，產(chǎn)生的熒光稱為發(fā)射光。熒光的波長總要長于分子吸收的紫外光波長，通常在可見光范圍內(nèi)。熒光的性質(zhì)與分子結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系，不同結(jié)構(gòu)的分子被激發(fā)后，并不是都能發(fā)射熒光。。

2、優(yōu)缺點

熒光檢測器zui大的優(yōu)點是靈敏度非常高，可以達(dá)到ppt級別。缺點是適用范圍窄，僅適用于被激發(fā)后能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，該缺點限制了熒光檢測器的應(yīng)用。

三、示差折光檢測器RID

RID是一種通用檢測器，對所有樣品都有響應(yīng)。

1、原理

示差檢測器是基于連續(xù)測定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動相的折光指數(shù)不同，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。

2、優(yōu)缺點

優(yōu)點是通用，沒有不能檢測的。

zui大缺點：靈敏度低，一般來說有關(guān)物質(zhì)檢測不能用它，RID一般用于含量測定；另一個缺點由它的原理決定，只能等度，所以多組分的分離存在問題。還有平衡時間過長，對環(huán)境要求高（尤其是室溫的波動）也是讓操作人員困擾的因素。

四、電噴霧檢測器CAD

一種新型的通用檢測器，賽默飛公司出品，目前處于保護(hù)期間。靈敏度優(yōu)于ELSD。

1、原理

首先，檢測器將分析物轉(zhuǎn)化成溶質(zhì)顆粒。顆粒的大小隨著被分析物的含量而增加。然后，溶質(zhì)顆粒與帶正電荷的氮氣顆粒相撞，電荷隨之轉(zhuǎn)移到顆粒上 – 溶質(zhì)顆粒越大，帶電越多。zui后，溶質(zhì)顆粒把它們的電荷轉(zhuǎn)移給收集器，通過高靈敏度的靜電檢測計測出溶質(zhì)顆粒的帶電量，由此產(chǎn)生的信號電流與溶質(zhì)的含量成正比。

2、優(yōu)缺點

優(yōu)點同ELSD，但是靈敏度更高。賽默飛的宣傳中將其推崇的神乎其神，但是它也有但是。缺點也同ELSD，線性較差，但優(yōu)于ELSD。在全量程范圍內(nèi)都是非線性響應(yīng)，但CAD的重現(xiàn)性更好且在小濃度范圍內(nèi)響應(yīng)基本呈線性。CAD雖然將原理改為使顆粒帶電檢測收集的電信號，使得濃度與響應(yīng)者在一定范圍內(nèi)直接呈線性關(guān)系。但是顆粒的形成過程是一個非物質(zhì)本身屬性決定的過程，也就意味著響應(yīng)是不穩(wěn)定的。不同于紫外檢測器，紫外吸收是物質(zhì)本身的屬性，不會更改，擁有良好的重現(xiàn)性。