液相色譜儀(HPLC)是分析實驗室常用的測試儀器之一，其被廣泛應用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領域。此種儀器在使用過程中，難免會出現各種各樣的問題，并將直接影響到所測數據的準確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，清楚預防和排除這些故障的方法，正確使用并維護好儀器，就能zui大限度地發(fā)揮儀器的性能。今天小編特地將科捷技術大神們多年的使用經驗總編成液相色譜儀使用注意事項大全，供大家參考使用。

一、流動相

首先流動相應選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經過濾后使用，過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；還有要注意水相流動相需經常更換（一般不超過2天），防止長菌變質；再就是在使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D（進液口位于混合器下方）放置含鹽流動相，B、C（進液口位于混合器上方）放置不含鹽流動相；A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶，用于存放水相流動相。

二、試管

1、注意試管的潔凈問題。

液相色譜分析法是一個很靈敏的分析方法，如果因使用不潔凈的試管，便會影響試驗結果的準確性。例如，在用甲醇作溶劑來溶解樣品時，所用的小試管是用橡膠塞來做蓋子的，因此，在每次進樣時，都有一個保留時間固定的干擾峰存在，后經證實，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產生，換用玻璃試管后，干擾峰消除。

2、塑料試管的溶解問題。

近年來，一次性塑料試管給試驗人員帶來了極大的方便，但是，在使用過程中一定要注意有機溶劑對試管的溶解現象，在利用此種試管提取樣品時，有些有機溶劑(如lu仿等)對管壁有溶解現象，這些被溶解下來的物質有時也能在檢測器上產生信號，從而干擾樣品的測定。這時，可用相同的實驗條件先行試驗一下，看看不含被抽提物時，提取液在檢測器上能否產生干擾信號，如確有干擾信號存在，就只能換用耐有機溶劑的玻璃試管了。

3、被測樣品在試管壁上的吸附問題。

這個問題也應引起注意，否則也會影響測試結果的準確性，在治療藥物監(jiān)測(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中，有些被測藥物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上，因此，操作中宜采用聚丙烯管，為防止提取中吸附現象的發(fā)生，可采用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑，可有效地防止吸附。

三、樣品：

1、 采用過濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒；

2、 用流動相或比流動相弱（若為反相柱，則極性比流動相大；若為正相柱，則極性比流動相?。┑娜軇┲苽錁悠啡芤?，盡量用流動相制備樣品液；

3、手動進樣時，進樣量盡量小，使用定量管定量時，進樣體積應為定量管的3～5倍；

四、進樣閥

目前，在分析型液相色譜儀中常用的進樣閥是7725型進樣閥，其內部的六通閥結構使進樣操作非常方便，但是，如果使用不當，也會帶來問題。例如，在液相色譜法的試驗過程中，有時會有異常色譜峰的出現以及重現性不好的問題，這主要是由于操作方法不當所引起，要想解決此類問題，需從以下幾個方面入手。

1、進樣量的控制。用進樣閥來進樣時，閥內的樣品環(huán)是定量的，(一般分析型進樣閥的樣品環(huán)體積為20ul)，由于進樣時，注射到進樣閥內的樣品溶液在樣品環(huán)的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環(huán)中充滿樣品溶液，從而使用進樣閥來準確地定量，則必須使進樣量大于樣品環(huán)體積的2倍。如果用注射器來控制進樣量，則zui大只能注射樣品環(huán)體積1/2的量，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導致定量分析的誤差。

2、進樣閥的清潔問題。如果樣品環(huán)中有上次進樣時樣品的殘留，必然會污染下次注射進的樣品，為防止這種現象的發(fā)生，應按下列步驟操作：a.進樣閥有2個位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時，以注射器將流動相注入進樣閥內清洗幾次，每次用量大約40ul；b.然后將進樣閥板手扳至INJECT位置時，再以流動相清洗幾次，每次用量還是40ul；c.zui后，再將樣品注射到進樣閥里。

按照上述的步驟操作，可以避免由進樣閥引起的污染，從而使干擾峰消除并提高分析結果的準確性。

3、進樣閥溢流管的堵塞。有時，進樣閥的溢流管會發(fā)生堵塞現象，向進樣閥內注射樣品時，注射針推不動。此故障是由于溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由于溶解樣品的流動相用的是鹽溶液，而其中的鹽在溢流管的排空端口處結晶所致。此時，可用小燒杯盛少量蒸餾水對溢流管口稍加浸泡，端口處鹽的結晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次進樣完成之后，用蒸餾水反復沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出，則可避免此故障的發(fā)生。

五、色譜柱：

1、 使用前仔細閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等；

2、 使用符合要求的流動相；

3、 使用保護柱；

4、 如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。

5、 色譜柱在不使用時，應用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存；

6、 不要高壓沖洗柱子；

7、 不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱。

六、流動相(MOBLLE PHASE)的問題

甲醇和乙腈在液相色譜分析法中常常被用來配制流動相。液相色譜法中常用的試劑是高等級的試劑，如色譜純試劑。在要求不太嚴格時，優(yōu)級純甚至分析純的試劑也能用。液相色譜分析法中常用的是紫外檢測器，因此，從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來考慮，應該使用紫外吸收小且雜質含量少的色譜純試劑。

1、流動相的過濾。配制好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發(fā)現的微小顆粒，如果不把它們?yōu)V除掉，就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時，要換用經過濾的流動相，并將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動相的脫氣。流動相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動相中的氣體，否則，這些氣體會使柱填料的性能降低，還能夠對檢測器的信號產生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮氣脫氣等。真空脫氣法和氮氣流脫氣法是目前zui常用的脫氣法。水和甲醇混合后會產生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會進入色譜柱和檢測器，并將影響分析工作的正常進行。

七、圖譜

長期使用后的色譜柱，如果有雜質進入，就會使色譜柱入口處的固定相“板結”并在流動相所產生的高壓作用下，形成柱頭的塌陷，被分析的樣品組分的正常色譜峰就變成了雙峰，這時可按下述方法來修復色譜柱。首先將柱頭的緊固螺母旋下，這時就會發(fā)現柱頭內的固定相已被壓縮進去了，嚴重時可縮進10mm以上。在這種情況下，我們可用針尖將流動相表層板結變黃的部分摳掉，并以相同的固定相將此塌陷區(qū)填平、壓實，再將色譜柱的緊固螺絲上緊，修復工作即告結束。用經過修復后的色譜柱再做樣品時，色譜峰就恢復正常了。

以上是嘔心瀝血的液相色譜儀使用注意事項大全，從幾個方面進行了詳細講解。希望大家看完能在日常工作中，對這些事項能夠認真對待，做到有問題及時解決，以延長儀器的正常使用期限，發(fā)揮儀器性能的zui大極限。