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      電泳操作步驟和聚焦后處理

      2017年04月01日 11:08:53人氣:458來源:上海谷研實業(yè)有限公司

      人elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟:1)將蛋白樣品于等體積的2×上樣緩沖液混合,10000×g離心5min以除去蛋白質(zhì)沉淀;2)用微量注射器將蛋白質(zhì)樣品加入到上樣空底部,注意不要溢出來。注意:對于考馬斯亮藍染色液來說,每個泳道10-30ug的蛋白混合粗提物(我們俗稱粗抗原)或者5-10ug單一蛋白組分是較合理的上樣濃度。
      電泳液:1)上槽中加入陰極電泳液(20mM:須由1M儲存液新鮮配置);
           2)下槽中加入陽極電泳液(10mM磷酸:須由1M儲存液新鮮配置)。
      等電聚焦電泳條件:1)接好電極;2)恒壓150V電泳30min;3)恒壓200V電泳2.5h,開始時候控制電流為10mA左右,在聚焦過程中電流有所下降,電泳內(nèi)室溫度在電泳的過程中將升至40-50攝氏度。
      人elisa酶聯(lián)免疫試劑盒電泳聚焦后處理:
         測定pH梯度:1)將凝膠條切成0.5cm或1cm的小片;2)將每小片凝膠在1ml 10mM KCl中 浸泡30min;3)測讀此KCl溶液的pH值、
         凝膠的固定:1)將凝膠于10%中浸泡10min;2)換成1%溶液繼續(xù)浸泡至少2h以上,以去除載體兩性電解質(zhì),浸泡過夜可以更好的降低考馬斯亮藍對載體兩性電解質(zhì)的染色。
         人elisa酶聯(lián)免疫試劑盒凝膠的染色:用考馬斯亮藍染色,然后脫色,制成干膠。

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