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      常見(jiàn)的免疫檢測(cè)技術(shù)

      2015年09月23日 14:28:52人氣:1673來(lái)源:上海研生生化試劑有限公司

      (一)免疫酶染色試驗(yàn) 免疫酶染色試驗(yàn)以含寄生蟲(chóng)病原的組織切片、印片或培養(yǎng)物涂片為固相抗原,當(dāng)其與待測(cè)標(biāo)本中的特異性抗體結(jié)合后,可再與酶標(biāo)記的第二抗體反應(yīng)形成酶標(biāo)記免疫復(fù)合物,后者可與酶的相應(yīng)底物作用而出現(xiàn)肉眼或光鏡下可見(jiàn)的呈色反應(yīng)。

      (二)皮內(nèi)試驗(yàn)  宿主在病原體刺激后,體內(nèi)產(chǎn)生親細(xì)胞性抗體(IgE和IgG4)。當(dāng)其與相應(yīng)抗原結(jié)合后,肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒,釋放生物活性物質(zhì),引起注射抗原的局部皮膚出現(xiàn)皮丘及紅暈,以此便可判斷體內(nèi)是否某有種特異性抗體存在。

      (三)免疫擴(kuò)散和免疫電泳

      1.免疫擴(kuò)散 于一定條件下,抗原與抗體在瓊脂凝膠中相遇,在二者含量比例合適時(shí)形成肉眼可見(jiàn)的白色沉淀。本法有兩種類型:①單相免疫擴(kuò)散:將一定量的抗體混入瓊脂凝膠中,使抗原溶液在凝膠中擴(kuò)散而形成沉淀環(huán),其大小與抗原量成正比;②雙相免疫擴(kuò)散:將抗原與抗體分別置于凝膠板的相對(duì)位置,二者可自由擴(kuò)散并在中間形成沉淀線。用雙相免疫擴(kuò)散法既可用已知抗原檢測(cè)未知抗體,也可用已知抗體檢測(cè)未知抗原。

      2.免疫電泳 是將免疫擴(kuò)散與蛋白質(zhì)凝膠電泳相結(jié)合的一項(xiàng)技術(shù)。事先將抗原在凝膠板中電泳,之后在凝膠槽中加入相應(yīng)抗體,抗原和抗體雙相擴(kuò)散后,在比例合適的位置,產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的弧形沉淀線。

      (四)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 

      vvv 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理是將抗原或抗體與底物(酶)結(jié)合,使其保持免疫反應(yīng)和酶的活性。把標(biāo)記的抗原或抗體與包被于固相載體上的配體結(jié)合,再使之與相應(yīng)的無(wú)色底物作用而顯示顏色,根據(jù)顯色深淺程度目測(cè)或用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值判定結(jié)果。

      (五)間接熒光抗體試驗(yàn) 

      vvv 本法用熒光素(異硫氰基熒光素)標(biāo)記第二抗體,可以進(jìn)行多種特異性抗原抗體反應(yīng),即可檢測(cè)抗原又可檢測(cè)抗體。本法具有較高的敏感性、特異性和重現(xiàn)性等優(yōu)點(diǎn),除可用于寄生蟲(chóng)病的快速診斷,流行病學(xué)調(diào)查和疫情監(jiān)測(cè)外,還可用于組織切片中抗原定位以及在細(xì)胞和亞細(xì)胞水平觀察和鑒定抗原、抗體和免疫復(fù)合物。

      (六)對(duì)流免疫電流試驗(yàn)  對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)是以瓊脂或瓊脂糖凝膠為基質(zhì)的一種快速,敏感的電泳技術(shù)。既可用已知抗原檢測(cè)抗體,又可用已知抗體檢測(cè)抗原。反應(yīng)結(jié)果可信度高,適用范圍廣。以本法為基礎(chǔ)改進(jìn)的技術(shù)有酶標(biāo)記抗原對(duì)流免疫電泳和放射對(duì)流免疫電泳自顯影等技術(shù)。二者克服了電泳技術(shù)本身不夠靈敏的弱點(diǎn)。

      (七)免疫印跡試驗(yàn)免疫印跡試驗(yàn)又稱免疫印漬或western blot,是由十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酸胺凝膠電泳(SDS-PAGE),電轉(zhuǎn)印及固相酶免疫試驗(yàn)三項(xiàng)技術(shù)結(jié)合為一體的一種特殊的分析檢測(cè)技術(shù)。本法具有高度敏感性和特異性。

      (八)間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn) 以紅細(xì)胞作為可溶性抗原的載體并使之致敏。致敏的紅細(xì)胞與特異性抗體結(jié)合而產(chǎn)生凝集,抗原與抗體間的特異性反應(yīng)即由此而顯現(xiàn)。常用的紅細(xì)胞為綿羊或O型人紅細(xì)胞。

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