熒光染料的優(yōu)點:
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合;
價格便宜;
熒光染料的缺點:
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Culicoides spp. |
貨號 | YSP96604 |
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熒光探針:
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點:
熒光背景低;
敏感性高;
雜交穩(wěn)定性高;
熒光光譜分辨率好;
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點:
成本高;
設(shè)計難度大;
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理:
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。
焦棓酚紅Phospho-ALK (Tyr1586) Antibody3,5-二甲基異噁唑-羧酸
(2-吡啶基)-5,6-雙(磺基)-1,2,三二鈉鹽水合物(>98.0%(HPLC))Jak1 (6G4) Rabbit mAb溴-氯甲酸,97%
2-鄰羥亞芐基氨基酚(>95.0%(T))Jak1 (6G4) Rabbit mAb(R)-哌啶甲酸乙酯
鋅試劑NME1/NDKA (D98) AntibodyN-甲基鄰
1,2-雙(二甲膦基)乙烷(>95.0%(GC))Ikaros (D6N9Y) Rabbit mAb (PE Conjuga)十二烷基磺酸鈉
內(nèi)消旋-2,二巰基丁二酸(>98.0%(T))SEK1 (5C10) Rabbit mAb氟-氯乙
N-(2,6-二基氨酰甲基)亞氨基二乙酸(>98.0%(HPLC)(T))Nestin (10C2) Mouse mAb環(huán)丁基
N-(2,6-二乙基氨酰甲基)亞氨基二乙酸(>99.0%(HPLC)(T))Synaptotagmin-1 Antibody2-溴并噻唑
1-羥基亞乙基-1,1-二膦酸(約60%水溶液,約4.2mol/L)BOB-1/OBF-1 Antibody二十二碳六酸
亞甲基二膦酸(>95.0%(T))Phospho-ALK (Tyr1586) (3B4) Rabbit mAb(嗎啉基)
吡哆-L-谷氨酸二鹽[藥物研究配體]SGTA Antibody硝基茴香硫
吡哆-L-異亮氨酸鹽[藥物研究配體]ApoA1 (5F4) Mouse mAb一縮二
1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷四鹽酸鹽(>98.0%(N))UTX (D3Q1I) Rabbit mAb庚酰氯
己二酸雙(2-乙基己基)酯(>98.0%(GC))CD79A Antibody氯基*氧基硅烷
叔戊基酚(>98.0%(GC))CD79A Antibody2-氨基-6-并噻唑
己基酚(>98.0%(GC))Stathmin Antibody【口+奈】啶
正庚基酚(>98.0%(GC))Stathmin Antibody喹唑啉
戊基酚(>97.0%(GC))Phospho-Stathmin (Ser16) Antibody2,二甲基-5-基-1H-吡咯-羧酸
庫蠓通用探針法熒光PCR檢測試劑盒金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒Proasome 20S LMP7 低分子質(zhì)量蛋白7抗體100 ul
解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA試劑盒P-selectin/CD62p P選擇素抗體100 ul
解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA試劑盒L-Selectin/CD62L L選擇素抗體100 ul
解整合素樣金屬蛋白酶19(ADAM19)ELISA試劑盒E-Selectin/CD62E E選擇素抗體100 ul
睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)ELISA試劑盒Patched/PTCH Patched/PTCH抗體20 ul
結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒CD63/MLA1 黑色素瘤相關(guān)抗原抗體100 ul
結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒CD64/IGFR1 免疫球蛋白G Fc段受體I100 ul
結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒CD66a/CEACAM1 癌胚抗原相關(guān)細胞粘附分子1抗體1 Kit
窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒PN/MMAC1(NT) 一種腫瘤抑制基因抗體(N端)100 ul
PCR技術(shù)的定量原理:
擴增曲線
在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。