樣品RNA的抽提:
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Listeria ivanovii |
貨號 | YSP96887 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
熒光定量PCR試劑盒技術:
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。
單-2-O-(對甲磺酰)-β-環(huán)糊精水合物(>97.0%(HPLC))6-溴-1,2,3,四氫異喹啉鹽酸鹽
單-2-O-(對甲磺酰)-α-環(huán)糊精(>98.0%(HPLC))6-溴-7-甲基喹啉
單-2-O-(對甲磺酰)-γ-環(huán)糊精(>95.0%(HPLC))6-溴-7-喹啉
*基-β-環(huán)糊精(>98.0%(HPLC))6-溴-8-喹啉
三酰基-β-環(huán)糊精(>97.0%(HPLC))8-甲基-6-溴喹啉
10,12-二十七二炔酸(>98.0%(GC))6-溴-8-喹啉
2,十七二炔酸(>95.0%(T))6-溴-8-硝基喹啉
2,二十一二炔酸(>95.0%(T))6-溴喹啉-8-羧酸
10,12-十七二炔酸(>97.0%(T))7-氨基-1,2,3,四氫喹啉
10,12-二十九二炔酸(>97.0%(T))7-氨基異喹啉
2,十九二炔酸(>97.0%(T))7-喹啉
10,12-二十五二炔酸(>97.0%(GC)(T))6--1,2,3,四氫異喹啉鹽酸鹽
2,十五二炔酸(>97.0%(T))6--2-甲?;拎?/span>
10,12-二十三聯(lián)炔酸(>98.0%(GC)(T))6--2-羥甲基吡啶
1,雙(*基硅基)-1,丁二炔(>99.0%(GC))6-煙酰
1-代丁炔(含穩(wěn)定劑銅屑)(>98.0%(GC))2-氨基-硝基-6-吡啶
-1-丁炔(>98.0%(GC))6--7-甲基喹啉
2,己二炔-1,6-二(>99.0%(GC))6--7-硝基喹啉
伊氏李斯特菌探針法熒光PCR檢測試劑盒視錐感光細胞環(huán)酸鳥苷門控通道蛋白CNG3抗體Menin/Men1/FITC 熒光素標記Menin抑癌蛋白抗體IgG100 ul
環(huán)核苷酸門控陽離子通道蛋白β3/CNG-β3抗體Metal ion transporr/FITC 熒光素標記擬南介金屬離子轉運蛋白抗體IgG1 Kit
非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體Metronidazole/FITC 熒光素標記抗甲硝唑抗體IgG100 ul
卷曲螺旋結構域蛋白152抗體Mfn1/FITC 熒光素標記線粒體融合蛋白1抗體IgG100 ul
甘油二酯膽酸轉移酶抗體MGMT /FITC 熒光素標記O6甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移酶抗體IgG500 ul
嗜鉻粒素B抗體MGr1-Ag/37LRP /FITC 熒光素標記層粘連蛋白受體1抗體(N端)IgG100 ul
血管加壓素激活鈣啟動受體蛋白1抗體MGr1-Ag/37LRP /FITC 熒光素標記層粘連蛋白受體1抗體(C端)IgG100 ul
細胞色素P450Ⅱj3抗體MICA/FITC 熒光素標記一種細胞應激分子抗體IgG100 ul
鈣激活離子通道4抗體MIP-1 Alpha/FITC 熒光素標記巨噬細胞炎癥因子1α抗體IgG100 ul