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更新時(shí)間：2022-12-14 13:16:03瀏覽次數(shù)：475次
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NanoDrop 2000-Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度NanoDrop ND-2000C為NanoDrop ND-2000的升級(jí)版本，ND-2000C具有ND-2000全部功能，除此之外，它還有以下突出特點(diǎn)：1、檢測耗時(shí)更短，僅需3秒鐘；2、具比色杯或者檢測孔兩種選擇，適合檢測各種類型的樣本，包括易揮發(fā)性物質(zhì)的檢測；
NanoDrop 2000-Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度
Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度計(jì)是NanoDrop的產(chǎn)品，應(yīng)用液體的表面張力特性，樣品體積只需要0.5~2ul，在檢測臺(tái)上，經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達(dá)到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細(xì)管等耗材檢測吸收值的優(yōu)點(diǎn)。此產(chǎn)品設(shè)計(jì)受保護(hù)，并在廣受歡迎，其準(zhǔn)確度與便利性讓科學(xué)家得以更有效率進(jìn)行各項(xiàng)研究。
Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度計(jì)使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm的全光譜檢測，且不需要暖機(jī)，開機(jī)后立即使用。搭配高感度CCD array檢測器，檢測吸收值可高達(dá)300Abs（dsDNA濃度2~15000ng/ul），大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測。
待測樣品的均質(zhì)性是NanoDrop 2000的zui高要求，一般核酸、蛋白質(zhì)樣品能在檢測前以vortex mixer震勻?yàn)閦ui勻，若無vortex mixer也應(yīng)以pipette吸放數(shù)次混勻。若擔(dān)心genomic DNA可能因前述動(dòng)作而斷裂，則改以55?C加熱約一分鐘，使樣品在偵測前呈現(xiàn)均勻狀態(tài)，以確保 2ul 具有代表性。
檢測時(shí)選擇不同檢測模式，可以得到zui快速的結(jié)果：
● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。
● UV-Vis – 190~840nm間所有波長的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現(xiàn)）。
● A280蛋白質(zhì)定量法 – 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio及蛋白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì)，須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)（mass extinction coefficient）方可計(jì)算。
● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結(jié)果，自動(dòng)畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算R square，待測蛋白質(zhì)濃度。
* 蛋白質(zhì)檢測模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑，因呈色劑隨時(shí)間會(huì)逐漸加深，使用前請?jiān)旈喸噭┱f明書并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，在zui快時(shí)間內(nèi)完成檢測，以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線zui多可有七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品zui多可做五重復(fù)。
* 測蛋白質(zhì)時(shí)樣品體積需使用 2ul，每個(gè)樣品檢測后需以Kimwipes 低塵擦拭紙（編號(hào)： 34155 ）擦拭15~20回，以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。
濃度范圍：
樣品種類 | zui低濃度 | zui高濃度 （*過時(shí)請稀釋樣品） | 再現(xiàn)性 （五重復(fù)以上） |
核酸 | 2 ng/ul | 15000 ng/ul （dsDNA） 12000 ng/ul （RNA） | 濃度范圍在 2-100 ng/ul 時(shí)，SD為 ± 2 ng/ul 濃度范圍大于 100 ng/ul 時(shí)，CV為 ± 2% |
純BSA | 0.10 mg/ml | 100 mg/ml | 濃度范圍在 0.05-10 mg/ml 時(shí)，SD為 ± 0.10 mg/ml 濃度大于 10 mg/ml 時(shí)，CV為 ± 2% |
蛋白質(zhì)，以BCA方式定量 | 0.2 mg/ml | 8.0 mg/ml | CV：± 2% （在可偵測的濃度范圍內(nèi)皆然） |
蛋白質(zhì)，以modified Lowry方式定量 | 0.2 mg/ml | 4.0 mg/ml | CV：± 2% （在可偵測的濃度范圍內(nèi)皆然） |
蛋白質(zhì)，以Bradford方式定量 | 100 ug/ml | 8000 ug/ml | 濃度范圍在 100-500 ug/ml 時(shí)，SD為 ± 25 ug/ml 濃度大于 500 ug/ml 時(shí)，CV為 ± 5% |
蛋白質(zhì)，以Mini Bradford方式定量 | 15 ug/ml | 100 ug/ml | 濃度范圍在 15-50 ug/ml 時(shí)，SD為 ± 4 ug/ml 濃度大于 50 ug/ml 時(shí)，CV為 ± 5% |
NanoDrop ND-2000C
產(chǎn)品描述：
NanoDrop ND-2000C為NanoDrop ND-2000的升級(jí)版本，ND-2000C具有ND-2000全部功能，除此之外，它還有以下突出特點(diǎn)：
1、檢測耗時(shí)更短，僅需3秒鐘；
2、具比色杯或者檢測孔兩種選擇，適合檢測各種類型的樣本，包括易揮發(fā)性物質(zhì)的檢測；
3、檢測范圍更加寬泛，檢測下限可低至0.4 ng/μl （dsDNA）；
4、內(nèi)置比色杯，可進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)力學(xué)曲線研究，或者OD600細(xì)胞濃度的測量。
ND-2000C技術(shù)參數(shù)：
檢測孔測量時(shí):
1、波長范圍: 190-840nm；
2、波長精度: 1nm；
3、分辨率: <1.8 nm （FWHM at Hg 253.7 nm）；
4、其它: 1mm光程長度（可自動(dòng)調(diào)整到0.05mm）；
5、檢測下限：2ng/μl（dsDNA）；
6、檢測上限：15000ng/μl（dsDNA）；
7、吸光率度：0.002 absorbance （1mm光程）；
8、吸光率準(zhǔn)確性：2%（at 0.76 at 257 nm）；
9、吸光率范圍：0.02-300 （相當(dāng)于10mm光程）；
10、核酸檢測周期：< 5s；
11、體積：14cm×20cm。
比色杯測量時(shí)：
1、光柱高度：8.5 mm；
2、控溫，37 ± 0.5 °C；
3、攪拌速度: 150 – 850 rpm;
4、四種光徑可供選擇，分別為1，2，5，10mm；
5、吸光率范圍：0.002 – 1.5；
6、檢測下限：0.4 ng/μl （dsDNA）；
7、檢測上限：750 ng/μl （dsDNA）；
8、檢測時(shí)間：< 3 s；
9、重量：2.1 kg.
二、使用方法舉例
dsDNA：
在主畫面點(diǎn)選Nucleic Acid，電腦與儀器自動(dòng)完成連線。依照DNA所溶於之液體準(zhǔn)備該溶液（務(wù)必確認(rèn)DNA溶於二次水、TE buffer或哪一組kit的elution buffer）取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測臺(tái)上，放下上臂後再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選 DNA-50，在Sample ID位置輸入樣品名稱，將樣品混勻，取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測臺(tái)上，放下上臂後再按Measure。點(diǎn)此觀看操作影片。
結(jié)果：
DNA濃度即以 9.691 x 50 = 484.5 算出。 260/280介於1.8~2.0通常代表此為較純的DNA（隨DNA組成不同會(huì)有差異）。 260/230高於260/280，介於1.8~2.2通常表示純化過程殘留污染物較少。若欲察看220~340nm間其他波長的吸收值，可使用滑鼠拉動(dòng)位於230nm的直線，或在右邊λ處輸入其他波長數(shù)值。
三、結(jié)果整理：
NanoDrop2000 軟體在偵測一開始會(huì)詢問檔案欲存至何處，若未，則檔案會(huì)存在上一個(gè)使用者的檔案內(nèi)。點(diǎn)此觀看或下載 Data 功能使用說明。
四、注意事項(xiàng)：
1. 偵測後立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭臺(tái)面。先取一張將上下臺(tái)面的液體吸走，再將此laboratory wipe吸過樣品的面反折到內(nèi)部，折疊四次後以單方向多次擦拭臺(tái)面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。
2. 同一滴液體只能做一次偵測，欲重複定量同一樣品，請擦掉前一滴，重新取出一滴進(jìn)行偵測。
3. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測量，隨各液體體積特性之不同會(huì)有不同體積需求，原則上不*過 2ul。並請使用2ul pipette避免體積不足導(dǎo)致液柱無法完整形成。唯蛋白質(zhì)樣品因呈色劑與蛋白質(zhì)本身特性，務(wù)必使用2ul進(jìn)行偵測。
4. 當(dāng)軟體跳出錯(cuò)誤訊息時(shí)，請?jiān)敿?xì)閱讀並依指示進(jìn)行障礙排除。發(fā)生的情形是在偵測過程液柱並未正確形成，軟體會(huì)出現(xiàn)以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下臺(tái)面，或樣品內(nèi)有泡泡，將上臂拉起後，擦掉該滴樣品，再重新進(jìn)行偵測，必要時(shí)可將樣品體積加大至2ul。
正確的液柱應(yīng)為：
5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之樣品，其他無腐蝕性之液體皆可使用。
五、日常與定期維護(hù)：
1.平時(shí)保持臺(tái)面及儀器本身清潔。
2.定期校正。
常見問題：
問 1. 使用多少液體做測量？
答 1. 2ul，基本上可使用 0.5~2ul 做測量，隨各液體體積特性之不同會(huì)有不同體積需求，原則上不*過 2ul。並請使用2ul pipette 避免體積不足導(dǎo)致液柱無法完整形成。
問 2. 如何清潔臺(tái)座？
答2. 使用 laboratory wipe 將上下座的液體吸走，再將此 laboratory wipe 吸過樣品的面反折到內(nèi)部，折疊四次後以單方向多次擦拭臺(tái)面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。點(diǎn)此觀看清潔臺(tái)座影片。
問3. 儀器多久需要校正？
答3. 每臺(tái)儀器出廠前皆經(jīng)過多次測試，並附上測試報(bào)告。新機(jī)一年校正一次，之後建議每半年再進(jìn)行一次校正。本公司備有一年兩次的校正合約，以原廠標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行定期校正。若有特殊狀況亦可個(gè)案處理。
問4. 燈源多久需要更換？
答4.一般而言儀器內(nèi)一個(gè)氙氣燈可偵測 350萬個(gè)樣品，依供電及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境會(huì)有些微差異。若儀器在初始化時(shí)反覆出現(xiàn)錯(cuò)誤訊息，請進(jìn)入Diagnostics內(nèi)進(jìn)行燈源強(qiáng)度確認(rèn)，若看不見任何光譜，即為燈源壽終之訊息。
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