磷酸化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBPε抗體

商品詳情：

英文名；phospho-CEBPE (Thr74)

別    名；CEBPE (phospho T74); p-CEBPE (phospho T74); C/EBP epsilon; CCAAT/enhancer binding protein (C/EBP) epsilon; CCAAT/enhancer binding protein epsilon; CCAAT/enhancer-binding protein epsilon; CEBPE; CEBPE_HUMAN; CRP 1; CRP1.

研究領(lǐng)域；細胞生物  免疫學(xué)  信號轉(zhuǎn)導(dǎo)  表觀遺傳學(xué)

抗體來源；Rabbit

克隆類型；Polyclonal

交叉反應(yīng)；(predicted: Human, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep, )

產(chǎn)品應(yīng)用；ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 （石蠟切片需做抗原修復(fù)）

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

理論分子量；31kDa

細胞定位；細胞核

性    狀；Liquid

濃    度；1mg/ml

免 疫 原；KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human CEBPE around the phosphorylation site of Thr74.: PG(p-T)P

亞    型；IgG

純化方法；affinity purified by Protein A

保存條件；Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事項：

抗體FC驗證實驗的詳細步驟如下：

一、細胞表面染色操作

1、細胞計數(shù)：收集培養(yǎng)細胞于15mL離心管，500g離心4分鐘后，去上清。

2、制備單細胞懸液：用0.5%BSA/PBS重懸細胞，離心后再次去上清，調(diào)整濃度為1x106個細胞/mL，分到96孔板中，每孔100μl。

3、可選：阻斷Fc受體（孵育10-20分鐘）。

4、一抗孵育：每孔加入100μl稀釋的一抗，2-8℃反應(yīng)30分鐘。

5、洗滌：離心去上清后，用0.5%BSA/PBS重懸，重復(fù)洗滌兩次。

二抗孵育（非熒光抗體）：加入熒光二抗，避光孵育30分鐘。

再次洗滌，重復(fù)步驟。

重懸細胞：用0.5%BSA/PBS保存，上機分析。

二、細胞胞內(nèi)染色流程

1、細胞計數(shù)與制備同上。

2、固定：加入細胞固定劑，20分鐘后洗滌。

3、細胞通透：通透后洗滌。

4、可選：阻斷Fc受體。

抗體純化的方法及步驟：

抗體是一類免疫蛋白，可識別并結(jié)合特定抗原，在生物研究以及臨床應(yīng)用中，純化得到高質(zhì)量的抗體十分重要。

一、凝膠過濾層析法

凝膠過濾層析法的原理是基于抗體分子的不同大小，利用不同孔徑的凝膠過濾介質(zhì)將目標分子（抗體）與較大分子（如蛋白質(zhì)等雜質(zhì)）分離開來。

具體操作步驟如下：

1. 將含有目標抗體的混合物加入到預(yù)先平衡好的凝膠柱中。

2. 使用緩沖液進行洗脫，較大分子無法通過凝膠柱而流出。

3. 目標抗體分子大小適中，可通過凝膠柱并被保留下來。

4. 最后使用洗脫緩沖液將目標抗體從凝膠柱中洗脫出來，得到純化的抗體。

二、親和層析法

親和層析法的原理是利用抗體分子與抗原之間的特異性結(jié)合來實現(xiàn)目標抗體的純化。

具體操作步驟如下：

1. 將含有目標抗體的混合物加入到預(yù)先包含特異性結(jié)合配體(如蛋白A、蛋白G等)的親和層析柱中。

2. 目標抗體與配體之間發(fā)生特異性結(jié)合。

3. 使用洗脫緩沖液將非特異結(jié)合的組分洗脫掉。

4. 最后使用洗脫緩沖液將目標抗體從親和層析柱中洗脫出來，得到純化的抗體。

三、離子交換層析法

離子交換層析法的原理是利用目標抗體分子與離子交換柱中固定的離子之間的相互作用來實現(xiàn)純化。

具體操作步驟如下：
1. 將含有目標抗體的混合物加入到預(yù)先平衡好的離子交換柱中。

2. 使用緩沖液進行洗脫，使與固定離子相同電荷的分子無法通過離子交換柱而流出。

3. 目標抗體由于表面電荷不同，能夠通過離子交換柱被保留下來。

4. 最后使用洗脫緩沖液改變pH或鹽濃度等條件，將目標抗體從離子交換柱中洗脫出來，得到純化的抗體。

四、逆向相色譜法

逆向相色譜法的原理是利用目標抗體分子與逆向相色譜柱中固定的疏水基團之間的相互作用來實現(xiàn)純化。

具體操作步驟如下：

1. 將含有目標抗體的混合物加入到預(yù)先平衡好的逆向相色譜柱中。

2. 使用緩沖液進行洗脫，使疏水性較低的分子無法通過逆向相色譜柱而流出。

3. 目標抗體由于表面疏水性不同，能夠通過逆向相色譜柱被保留下來。

4. 最后使用洗脫緩沖液改變?nèi)軇O性等條件，將目標抗體從逆向相色譜柱中洗脫出來，得到純化的抗體。

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