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化工部主營:標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液,PH緩沖液,指示劑等。
胎牛血清,特級胎牛血清,優(yōu)級胎牛血清,Gibco胎牛血清,Hyclone胎牛血清,進口胎牛血清 小牛血清 細(xì)胞培養(yǎng)血清
標(biāo)記抗體(一抗)
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單克隆抗體:
(monoclonal antibody,McAb)克隆選擇學(xué)說:淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合的受體,一種細(xì)胞帶一種受體,進入機體的抗原選擇性的結(jié)合其中的個別淋巴細(xì)胞,使之活化,增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群,分泌同樣的抗體。當(dāng)抗原進入體內(nèi),在機體中就會誘導(dǎo)出針對不同抗原決定簇的多種抗體,如果要把這些抗體一一分開,用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的。1975年科勒(Kohler)和米爾斯坦(Milstein)將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合,培養(yǎng)出既能迅速生長無限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。從而獲得針對某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體。1995年,Katherine Knight博士在美國芝加哥Loyola大學(xué)成功地從轉(zhuǎn)基因兔中獲得了骨髓瘤細(xì)胞(Plasmacytoma),開創(chuàng)了兔單克隆抗體技術(shù)。與鼠單抗相比,兔單抗具有:首先,兔抗血清通常含有高親和力抗體,可以比鼠抗血清識別更多種類的表位;其次,兔單克隆抗體能夠識別許多在小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原;第三,由于兔脾臟較大,可以更多進行的融合試驗,使得高通量篩選融合成為可能。
抗體的親和力 :
是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol,通常K的范圍在 108 ~1010 /mol,也有多達 1014 /mol??贵w親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
生物活性:
?。?)特異性結(jié)合抗原:抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞,通常需要補體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而,抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合,直接發(fā)揮中和病毒的作用。
(2)激活補體:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補體,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。
?。?)結(jié)合細(xì)胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細(xì)胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
?。?)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
?。?)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
(7)通過與細(xì)胞Fc受體結(jié)合發(fā)揮多種生物效應(yīng) ?、僬{(diào)理作用 IgG、IgM的Fc段與吞噬細(xì)胞表面的FcγR、FcμR結(jié)合,增強其吞噬能力,通常將抗體促進吞噬細(xì)胞吞噬功能的作用稱為抗體的調(diào)理作用 (opsonization)。 ②發(fā)揮抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。
單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別?
抗原上那部分可以引起機體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu),叫做抗原決定簇。一個抗原上可以有好幾個不同的抗原決定簇,因而使機體產(chǎn)生好幾種不同的抗體,zui終產(chǎn)生出抗體是漿細(xì)胞。只針對一個抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個純系,純系的英文為Clone,音譯就是克隆。
由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,就象導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟:
1、制備抗原。
2、選擇實驗動物。
3、動物免疫。
4、試取血進行測試,看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫,殺死實驗動物,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。
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