PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn)，即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線(xiàn) (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩?lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線(xiàn)檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線(xiàn)性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線(xiàn)性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
石蠟切片組織PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒　Claudin 7 ELISA Kit　100 ul

載玻片細(xì)胞PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒　CLEC10A/CD301 ELISA Kit　100 ul

冰凍切片組織PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒　CPOX(Coproporphyrinogen oxidase) ELISA Kit　100 ul

石蠟切片組織PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒　CIN85 ELISA Kit　100 ul

細(xì)胞PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒　CREB1 ELISA Kit　100 ul

細(xì)胞PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒　CKAP4 ELISA Kit　100 ul

PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒　CKS2 ELISA Kit　20 ul

PI-3 KINASE P110BETA蛋白免疫共沉淀分析試劑盒　Cortactin ELISA Kit　100 ul

PI-3 KINASE P110BETA蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒　Claudin 23 ELISA Kit　250 ml

細(xì)胞PP2A蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒　CREB3L2 ELISA Kit　25 ml

載玻片細(xì)胞PP2A蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒　CREST Kit　5 mg

冰凍切片組織PP2A蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒　CREB1 ELISA Kit　5 mg

石蠟切片組織PP2A蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒　Claudin 7 ELISA Kit　1 mg

載玻片細(xì)胞PP2A蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒　CREB3L2 ELISA Kit　100 ul

冰凍切片組織PP2A蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒　CD81(CD81 antigen) ELISA Kit　100 ul

石蠟切片組織PP2A蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒　CKS2 ELISA Kit　100 ul
單端孢霉屬通用探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒γ氨基丁酸運(yùn)載蛋白3抗體AGPA/PCA(Human gastric parietal cell antibody) ELISA Kit  抗胃壁細(xì)胞抗體100 ul

GTP酶IMAP家族成員1抗體ARA(Human gastric parietal cell antibody) ELISA Kit  抗網(wǎng)硬蛋白抗體100 ul

GTP酶IMAP家族成員2抗體MCV(Human mutad citrullinad vimentin antibody) ELISA Kit  抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體1 Kit

GTP酶IMAP家族成員3抗體AMA IgA(Human myelin antibody IgA) ELISA Kit  抗髓脂抗體IgA100 ul

GTP酶IMAP家族成員4抗體MCV(Human myelin antibody IgA) ELISA Kit  抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體100µl

GTP酶IMAP家族成員5抗體AMA IgA(Human myelin antibody IgA) ELISA Kit  抗髓脂抗體IgA300 ul

G蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)神經(jīng)突增生蛋白2抗體Human parotid duct antibody ELISA Kit  抗腮腺管抗體100 ul

GTP酶IMAP家族成員7抗體Human cartilage-antibody ELISA Kit  抗軟骨抗體100 ul

GTP酶IMAP家族成員8抗體AhCGAb(Human chorionic gonadotropin-antibody) ELISA Kit  抗絨毛膜促性腺激素抗體100 ul