人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)酶聯(lián)免疫分析ELISA
2009/1/8 19:41:22 來源:中國智能制造網(wǎng)
本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中t-PA水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入t-PA抗原、生物素化的抗人t-PA抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的t-PA呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為10000 pg/mL,做系列倍比稀釋后,分別稀釋成10000 pg/mL,5000 pg/mL ,2500 pg/mL,1250 pg/mL,625 pg/mL,312 pg/mL,156 pg/mL,其原液直接作為最高標準濃度,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/mL,臨用前15分鐘內配制。
如配制5000 pg/mL標準品:取0.5ml 10000 pg/mL的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100ul),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
7. 檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
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