Annexin Ⅴ-FITC/PI Kit / 細胞凋亡檢測試劑盒

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   細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸（PS）從細胞膜內轉移到細胞膜外，使PS 暴露在細胞膜外表面。PS 是一種帶負電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內面，在細胞發(fā)生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS 暴露在細胞膜外。Annexin V 具有易于結合到磷脂類如PS 的特性，對PS 有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS 轉移到細胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就破壞了。因此，可以采用Annexin V 與PI 雙染的方法，通過流式檢測細胞早期凋亡。

儲存條件2-8℃避光保存,勿冰凍。

試劑盒組份

1. 結合緩沖液4x (Binding Buffer 4x)

體積：20 Tests: 4ml（4 倍濃縮液）

50 Tests: 10ml（4 倍濃縮液）

100 Tests: 20ml（4 倍濃縮液）

稀釋后溶液中各組分濃度：10mM Hepes/NaOH, pH 7.4, 140mM NaCl, 2.5mM CaCl2

2. 碘化丙錠溶液（Propidium Iodide, PI）

體積： 20 Tests: 0.2ml

50 Tests: 0.5ml

100 Tests: 1.0ml

濃度： 20ug/ml

3. 重組人Annexin V/FITC, (rh Annexin V/FITC)

來源：大腸桿菌（E.coli）

分子量：35.8 KDa

樣品量：20 Tests: 0.1ml，可用于20 次實驗

50 Tests: 0.25ml，可用于50 次實驗

100 Tests: 0.5ml，可用于100 次實驗

保存方法：于50mM Tris, 100mM NaCl, 1%BSA, 0.02%NaN3,pH7.4 溶液中保存

純度：SDS-PAGE 及反相HPLC 表明純度大于98%

生物活性：Annexin V 可結合于磷酯酰絲氨酸并表現(xiàn)出抗磷酯酶活性

細胞凋亡流式檢測應用

標記的Annexin V 可結合流式細胞儀用于檢測細胞外膜上的磷酯酰絲氨酸，操作流程如下：

1. 用去離子水按1:4 稀釋結合緩沖液（4ml 結合緩沖液+12ml 去離子水）；

2. 用4℃預冷的PBS 洗細胞兩次，用250ul 結合緩沖液重新懸浮細胞，調節(jié)其濃度為1×106/ml；

3. 取100ul 的細胞懸液于5ml 流式管中，加入5ul Annexin V/FITC 和10 ul 20ug/ml 的碘化丙錠溶液；

4. 混勻后于室溫避光孵育15 分鐘；

5. 在反應管中加400 ul PBS，流式細胞儀（FACS）分析

（注：消化細胞時不能用含EDTA 的胰酶）