熒光染料的優(yōu)點(diǎn):
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合;
價(jià)格便宜;
熒光染料的缺點(diǎn):
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩?lái)說(shuō),SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱(chēng) | |
英文名稱(chēng) | Ranavirus |
貨號(hào) | YSP97132 |
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熒光探針:
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題,反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):
熒光背景低;
敏感性高;
雜交穩(wěn)定性高;
熒光光譜分辨率好;
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn):
成本高;
設(shè)計(jì)難度大;
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。?
熒光定量PCR原理:
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。
水通道蛋白12B(AQP12B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 單增李斯特氏菌 250mg
ATP合酶6(ATP6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 枯草芽孢桿菌 100g
NADH脫氫酶1(ND1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 果生鏈核盤(pán)菌 25g
細(xì)胞色素b(COB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 美澳型核果褐腐病菌 500g
信號(hào)素4B(SEMA4B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 凝結(jié)芽胞桿菌 5g
半胱氨酸蛋白酶抑制劑9(CST9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 短小芽孢桿菌 100g
外核苷酸焦酸酶/酸二酯酶5(ENPP5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 草色串孢 25g
魚(yú)精蛋白3(PRM3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 多座蟲(chóng)草* 5g
神經(jīng)肽VF(NPVF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 黑木耳 100g
絲氨酸蛋白酶肽酶抑制因子B支成員11(SERPINB11)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 黑曲霉 1g
鈣黏蛋白24(CDH24)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 地下節(jié)桿菌 25g
腦啡肽酶2(NEP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 解淀粉芽孢桿菌 5g
分揀連接蛋白10(SNX10)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 枯草芽孢桿菌 100g
分揀連接蛋白14(SNX14)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 25g
分揀連接蛋白16(SNX16)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 小鏈霉菌 500g
矢車(chē)菊苷β6(CENTβ6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 繩生毛殼 1g
白介素1θ(IL1θ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 釀酒酵母 25g
紋蛋白3(STRN3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 黑木耳(186) 5g
蛙病毒探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒DCN1樣蛋白2抗體FOXM1/HFH 11 peptide 插頭蛋白M1抗原1 Kit
熱休克蛋白J2抗體Measles virus of fusion proin 麻疹病毒抗原(麻疹病毒融合蛋白)100 ul
雙特異性酪氨酸酸化調(diào)節(jié)激酶1B抗體FSH-R(Follicle-stimulating hormone receptor precursor) 促卵泡刺激素受體抗原100 ul
二?;视图っ?抗體FSH(Follicle-stimulating hormone precursor) 促卵泡刺激素抗原100 ul
DNA依賴(lài)蛋白激酶催化亞基抗體GABRA1(gamma-aminobutyric acid (GABA) A receptor, alpha 1) γ1氨基丁酸A型受體α1抗原100 ul
雙同源框蛋白4抗體GABAB1(GABAb Receptor 1) g-氨基丁酸B1受體(多肽)500 ul
無(wú)精癥缺失基因1抗體GABABR2/GB2(GABA B Receptor 2) γ1氨基丁酸A型受體B2抗原100µg
酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶2抗體GAD-67 (glutama decarboxylase 67) 谷氨酸脫羧酶-67抗原100 ul
通道蛋白DRK1抗體GADD153(Growth arrest and DNA damage-inducible 153) 生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因153抗原100 ul
PCR技術(shù)的定量原理:
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。