客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Aggregatibacter actinomycetemcomitans |
貨號 | YSP96361 |
熒光定量PCR試劑盒技術(shù):
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
D-半乳糖酸C30H52O甲基異惡唑-5-甲酸
D-半乳糖酸(標(biāo)準(zhǔn)品)C15H28N2O4S 甲基-5-甲酸
骨化三C8H8O42,3,5-三氯吡啶
坎地沙坦酯C14H16O3對亞二甲苯雙(氯化三苯基膦)
坎地沙坦酯(標(biāo)準(zhǔn)品)C12H9NO22-氨基-5-氟苯甲酸甲酯
卡奈替尼C59H96O26甲氧基-2,二甲
GEMSAC10H12O4甲基吲哚-2-甲酸乙酯
枸櫞酸噴托維林/托可拉斯/妥克拉司C35H58O6溴-5-氯苯甲
卡洛芬C8H8O4[(嗎啉基)苯基]酸
卡洛芬(標(biāo)準(zhǔn)品)C6H18O24P63,二氟
長春質(zhì)堿(標(biāo)準(zhǔn)品)C6H18O24P6·xNa+·yH2O癸酰氯
阿苯達(dá)唑(標(biāo)準(zhǔn)品)C9H8O4Na2甲氧基-
阿苯達(dá)唑C6H6Ca6O24P6均*苯磺酸鈉
西立伐他汀鈉C24H40O4氯噻吩
西替利C24H40O42-溴-氟
醋酸西曲瑞克C20H18O72-氨基-3,二氟苯甲酸
白屈菜紅堿C9H11NO4乙氧基二苯甲酮
醋酸氯己定C10H15NO反式-1,二氯-1-烯
放線共生放線桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)ELISA試劑盒BRCA2 癌易感基因2抗體100 ul
可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒BrdU 溴脫氧尿苷抗體20 ul
可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)ELISA試劑盒BrdU 溴脫氧尿苷單克隆抗體1 ml
可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒BrdU 溴脫氧尿苷抗體100 ul
可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(sTREM-1)ELISA試劑盒BRN3A 轉(zhuǎn)錄因子Brn3蛋白抗體100 ul
可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒Brs3/Bombesin Receptor 3 蛙皮素受體3抗體100 ul
可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)ELISA試劑盒SMARCA4/SNF2 beta 抑癌基因SNF2β抗體100 ul
可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)ELISA試劑盒Brucella 布魯氏菌抗體20 ul
可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ELISA試劑盒BRMS-1 癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體100 ul
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。