熒光定量PCR試劑盒技術:
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數據分析,提供實驗報告給您。
產品名稱 | |
英文名稱 | Shigella spp. |
貨號 | YSP97194 |
樣品RNA的抽提:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
酸二酯酶8A(PDE8A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 晶粒鬼傘 100ml
酸二酯酶8B(PDE8B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 青色鏈霉菌 25ml
酸二酯酶9A(PDE9A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95%,對映體混合物, 主要是(S)-型 青霉 25g
酸二酯酶10A(PDE10A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95%,對映體混合物, 主要是(S)-型 血桿菌 5g
酸二酯酶11A(PDE11A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) AR 三葉膠灰星菌 100g
酸二酯酶12(PDE12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) AR 假灰鏈霉菌 500g
甘油酸二酯酸二酯酶1(GDE1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) AR,99% metals basis 佛雷德里克斯堡假單胞菌 10g
Nebulette蛋白(NEBL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) AR,99% metals basis 戴爾福特菌屬 250g
神經連接蛋白3(NLGN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) AR,99% metals basis 大腸埃希氏菌 50g
神經連接蛋白2(NLGN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 長根靜灰球菌 250ml
N-肉豆蔻?;D移酶1(NMT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 虎掌菌* 50ml
核仁蛋白4(NOL4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 1g
核仁蛋白3(NOL3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 傳染性支氣管炎病毒 5g
核仁蛋白6(NOL6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% Formosa 5g
核仁蛋白7(NOL7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 25g
核仁蛋白8(NOL8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 隱花青鵝膏 5g
腎結核蛋白4(NPHP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 艾高夫氏亮菌 100g
核仁酸蛋白2(NPM2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 粗壯假絲酵母 25g
志賀氏菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒內皮粘蛋白EMCN抗體HIV-1(human immunodeficiency virus type 1) 艾滋病病毒-1/類免疫缺陷病毒1型(抗原)100 ul
環(huán)酸腺苷調節(jié)鳥嘌呤核苷酸交換因子1抗體HIV-1(human immunodeficiency virus type 1) 艾滋病病毒-1/類免疫缺陷病毒1型(抗原)100 ul
酸化轉錄因子E2F1抗體Measles virus proin(Plant2 derived measles virus hemagglutinin proin) 麻疹病毒紅血球凝集素蛋白多肽10 ug
上皮細胞特異性轉錄因子1抗體Measles virus proin(Plant2 derived measles virus hemagglutinin proin) 麻疹病毒紅血球凝集素蛋白多肽10 ug
內皮素2抗體HMGB1 (High Mobility Group Box proin 1) 高遷移率族蛋白-1(抗原)100 ul
內皮細胞受體蛋白酪氨酸激酶B3抗體HSL(hormone-sensitive lipase) 荷爾蒙敏感脂肪酸(抗原)100 ul
軟骨外胚層發(fā)育不良相關蛋白抗體HSP-27(Heat Shock Proin 27) 熱休克蛋白-27(抗原)100 ul
髓鞘蛋白P0樣蛋白2抗體HSP-90Alpha(Heat Shock Proin 90Alpha ) 熱休克蛋白90α(抗原)100 ul
雌激素受體α抗體HSP-90 Beta (heat sock proin-90 Beta) 熱休克蛋白-90β (抗原)20 ul