大鼠蛋白激酶-A（PKA）試劑盒代測

本試劑盒僅供研究使用      標(biāo)本：組織勻漿

大鼠蛋白激酶PKA試劑組成

精密度微孔板96孔（Microtitration Strips）1塊2～8℃干燥保存

酶標(biāo)偶合液（Conjugate ）   1瓶 12.0毫升2～8℃冷藏保存

標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）5瓶 各1.0毫升2～8℃冷藏保存

呈色劑A（Substrate A） 1瓶 6.0毫升2～8℃避光冷藏保存

呈色劑B（Substrate B） 1瓶 6.0毫升2～8℃避光冷藏保存

終止液（Stopping Solution）1瓶 6.0毫升室溫保存

20倍濃縮洗滌液（Rinsing Buffer x 20）1瓶 60.0毫升2～8℃冷藏保存

5倍濃縮樣品稀釋液（Diluent x 5）1瓶 15.0ml2～8℃冷藏保存

英文說明書，中文說明書各一份室溫保存

注意事項

1.  此試劑為體外檢測試劑，效期內(nèi)使用，試劑應(yīng)視為傳染物，不同總批號的試劑不能混用。

2．使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘，

3．濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后，請于37℃孵育15分鐘。

4．濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后，請于37℃孵育15分鐘

5．若24小時內(nèi)進(jìn)行實驗，標(biāo)本可存放于2～8℃。不需及時實驗，標(biāo)本-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

6．在反復(fù)清洗微孔板，并扣干微孔中的殘余液體，否則將降低度，造成吸光度偏離的假像。

7．加樣完畢后，應(yīng)注意輕微搖動微孔反應(yīng)條，以便使孔中的液體充分混勻。

8．試劑盒保存于2～8℃，請勿冷凍，有效期請見盒內(nèi)標(biāo)示。

實驗前準(zhǔn)備

1．大鼠蛋白激酶PKA使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。

2．準(zhǔn)備各種實驗儀器及材料，如微量移液器，吸頭，醫(yī)用蒸餾水等

3．濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液

4．濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液

5．用應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品，按照1：100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中，充分混勻待用。）

操作步驟

1．取出酶標(biāo)板，設(shè)空白孔，依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中（空白孔視為0號標(biāo)準(zhǔn)品，用醫(yī)用蒸餾水替代）

2、分別標(biāo)記樣品編號，加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中（不同的樣本采用不同的吸頭）。

3、將酶標(biāo)板置于37℃溫育30分鐘；

4、將酶標(biāo)板板取出，將其中的液體甩去，每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后，立即甩去液體;

5、每個孔中加滿應(yīng)用洗滌液后，輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

6、重復(fù)第5個步驟5次，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

7、在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入100μl的酶標(biāo)偶合溶液。

8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘。

9、將酶標(biāo)板取出，將其中的液體甩去，每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后，立即甩去液體。

10、每個孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后，室溫輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

11、重復(fù)第5個步驟5次，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

12、在每個孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻。（A液、B液采用不同的吸頭加樣）

13、將酶標(biāo)板置于37℃避光溫育反應(yīng)15分鐘。

14、每個微孔中加入50μl的終止液，輕輕振蕩混勻。

15、在酶標(biāo)儀上，450nm處測定OD; 顯色后，15分鐘內(nèi)進(jìn)行測定。

16、根據(jù)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣本含量

結(jié)果判斷

1. 儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；

2、檢測值范圍：0－40IU/L

3、敏感度：0.1IU/L