一站式DNA尿素-PAGE電泳套裝
產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是專門用于DNA尿素-PAGE電泳的一站式試劑盒，它具有下列特點(diǎn):
1.一站式，即開即用，用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分，十分方便。用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分。
2.可用于DNA測(cè)序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase保護(hù)實(shí)驗(yàn)等。
3.安全，免去了實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。
4.電泳后可直接用于銀染、EB染色等實(shí)驗(yàn)。
規(guī)格及成分成份30次大紙盒包裝
電泳級(jí)尿素（100873）210 g
電泳級(jí)丙烯酰胺（100876）60 g
電泳級(jí)甲叉雙丙烯酰胺（100877）3 g
10×TBE 電泳液（90313）250 mL
電泳級(jí)TEMED（100880）1.5 mL
電泳級(jí)過(guò)硫酸銨（100879）1 g
2×尿素-PAGE上樣液（100874）1 mL
使用手冊(cè)1份

運(yùn)輸及保存常溫運(yùn)輸，保存條件見上表，有效期一年。
自備試劑去離子水
使用方法一、PAGE濃度和交聯(lián)度的選擇指南
尿素-PAGE一般推薦用29：1（丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺）的交聯(lián)度，在此條件下，DNA片段和zui適PAGE濃度對(duì)應(yīng)關(guān)系如下：
單鏈DNA長(zhǎng)度*PAGE濃度二甲苯青FF遷移率對(duì)應(yīng)的長(zhǎng)度溴酚藍(lán)的遷移率應(yīng)的長(zhǎng)度
50-400 nt8%160 nt45 nt
200-1000 nt5%260 nt65 nt
750-2000 nt3.5%460 nt100 nt

二、制備尿素-PAGE膠
1.配制尿素-PAGE膠（這是配制100 mL膠的用量，配制更大體積的膠則需以此用量為基礎(chǔ)按比例增加）
A：新鮮配制10%的APS（過(guò)硫酸銨）：按每0.1克過(guò)硫酸銨干粉加1mL超純水的比例將水加到裝有硫酸銨干粉的1.5 mL EP管中，搖晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鮮交聯(lián)度為29：1的40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液（AB溶液，下同）：在裝有60g電泳級(jí)丙烯酰胺干粉的瓶中加入約130 mL自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會(huì)溶解在這少量溶液中）。充分搖晃混勻后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
B：配尿素-PAGE膠：在一個(gè)250 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去離子水、40%AB溶液和10×TBE緩沖液。丙烯酰胺單體溶液具有神經(jīng)毒性，一定要戴手套操作。
PAGE
膠濃度各成分用量（尿素為克，其余單位是mL）補(bǔ)水到
（mL）
尿素40%AB溶液10×TBE
緩沖液
5%4212.55.0100
6%4215.05.0100
7%4217.55.0100
8%4220.05.0100
9%4222.55.0100
10%4225.05.0100
11%4227.55.0100
12%4230.05.0100
C：攪拌溶解，然后用濾紙過(guò)濾。能抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣（氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應(yīng)），無(wú)條件也可以不脫氧。
D：加入500uL 10%APS和100uL TEMED，迅速搖勻后倒膠。
E: 在膠的液面距離達(dá)到頂部時(shí)停止灌膠，插入梳子。
F: 室溫聚合30-60分鐘（低溫抑制聚合反應(yīng)）。
G: 拔出梳子，用0.5×TEB液沖洗加樣孔。
三、樣品準(zhǔn)備
2.對(duì)一般樣品、測(cè)序樣品、微衛(wèi)星DNA、AFLP樣品、DDRT樣品、RPA樣品：將樣品跟上樣液1:1混合，95℃ 3分鐘變性，然后放冰上待用。
3.對(duì)TGGE樣品：可以直接上樣。
四：電泳
4.將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽中加入足夠0.5×TEB電泳液。
5.預(yù)電泳5-30分鐘將冰上放置的樣品上樣。
6.連接電源線，打開電源開關(guān)。根據(jù)膠的大小選擇功率（固定功率可以固定產(chǎn)熱，這樣不容易發(fā)生過(guò)熱而使膠板破裂的現(xiàn)象。如果固定電流或電壓，產(chǎn)熱都將隨電泳時(shí)間而變化，不好控制）。
對(duì)小膠一般用5-6W固定功率，大膠用15-25W固定功率。
7.終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)的處理（如銀染）。注意：如果銀染，必須延長(zhǎng)固定時(shí)間以便讓洗出尿素，否則殘留尿素會(huì)干擾后面的銀染。