Lowry法蛋白定量試劑盒的改良

    Lowry法是zui常用也是被引用次數(shù)zui多的蛋白質(zhì)定量方法。其原理是在堿性條件和福林酚Folin-Ciocalteu Reagent存在下，銅離子與蛋白質(zhì)形成可溶性蘭色復(fù)合物，在750 nm有zui大光吸收值。Lowry法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，對(duì)脂質(zhì)、SDS等干擾物質(zhì)不甚敏感。經(jīng)典Lowry法的主要缺點(diǎn)是，每次蛋白定量之前必須用兩種不同的試劑A和B （Reagent A and B）新鮮配制堿性銅試劑（Reagent C）。堿性銅試劑（Reagent C）不穩(wěn)定因而必須每天新鮮配制；另外，經(jīng)典Lowry法產(chǎn)生的蛋白顏色復(fù)合物穩(wěn)定性較差，在反應(yīng)20-120分鐘內(nèi)變化9.2%；蛋白濃度低于15μg/ml時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線的重復(fù)性較差；本試劑盒采用改良的Lowry法，用單一添加有穩(wěn)定劑的堿性銅試劑代替經(jīng)典Lowry法的試劑A、試劑B、和試劑C。這種改良?jí)A性銅試劑在室溫下穩(wěn)定12個(gè)月以上；測(cè)定反應(yīng)產(chǎn)生的銅蛋白-藍(lán)色復(fù)合物相當(dāng)穩(wěn)定，在2小時(shí)內(nèi)的變化不超過0.3%；反應(yīng)曲線幾乎*與原有方案吻合，重復(fù)性佳。因而改良Lowry法蛋白定量試劑盒與BCA法蛋白質(zhì)定量試劑盒一樣，具有非常好的試劑穩(wěn)定性、檢測(cè)靈敏度、和重復(fù)性，并且測(cè)定過程變得十分簡(jiǎn)捷，是經(jīng)典Lowry法忠實(shí)用戶的理想選擇。